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植物生物技术教学实践教学大纲 实践课程编号学分：2.5 适用专业：农学 开课学期：3 实践周数：16学时 先修课程：植物组织培养 一、实践教学的目标与任务： 学生通过本课程学习，使学生能够比较系统地了解植物组织培养在现代生物学研究和生产实践中所起到的重要作用， 教学组织 了解国内外植物组织培养的发展概况和发展趋势，理解植物组织培养的原理，掌握现代植物组织培养技术的一般操作程序和自主研究的方法，懂得植物组织培养在植物遗传育种、植物脱毒快繁、植物资源保存和植物次生代谢物生产等方面的基本应用技术。 实践教学地点 宜春学院生命科学与资源环境学院逸夫楼实验室 四、实践考核的方式及评分要求 实验操作结合实验报告 五、教学内容与时间安排 项目编号 实验项目名称 实验类型 开出要求 学时分配 001 培养基的配制及其灭菌 验证性 必做 4 002 外植体灭菌及初代培养 验证性 必做 4 003 植物快速繁殖 验证性 选做 4 004 植物组培苗生根培养 综合性 必做 4 学时总计 16 实验项目1：培养基的配制及其灭菌 教学内容 准备化学药品 按培养基中的各种成分准备好化学药品，把各个成分按照浓缩比例计算配一定量母液的称量数、扩大倍数、配1L培养基的吸取量，制成配制表。准备所有需要的仪器用具，清洗并烘干。称量 用电子天平按配制表上的量逐一称取各种试剂，同种贮存液成分加入同一容量瓶。溶解和定容 先将药品用蒸馏水溶解(可用磁力搅拌器加热和搅拌帮助溶解)，再将母液分别定容。贴上标签，注明配制日期、药品名称、扩大倍数，铁盐要避光保存，贮存于4℃冰箱内。 二、培养基的配制 1 称取8克琼脂，30克蔗糖置于烧杯中加双重水至600ml，在水浴锅中加热溶解。 2 按量加入各种贮备液，包括植物生长调节物质。如果由于特殊原因有必要在高压灭菌之后再加入维生素和生长素，那么在调节了PH值之后，可通过过滤灭菌加入。 3 加蒸馏水定容至1000ml。 4 充分混合之后，用0.1mol/L的HCl或0.1mol/L的NaOH调节培养基的PH值，用酸度计或精密PH试纸（PH5.4~7.0）进行测定。 5 把培养基分装到所选用的培养容器中，每个试管约装15ml，三角瓶约装50ml。 6 用脱脂棉塞住瓶口，外面用牛皮纸包住，用橡皮筋扎紧。 7 进行高压灭菌，在121℃下灭菌15min。 8 使培养基在室温下冷却，把培养基做成斜面，冰箱中4℃下保存。 教学目标 了解植物组织培养所用培养基的成分组成。 熟悉配制培养所用到的仪器设备。 掌握培养基的配制方法，掌握操作技术。 实验项目2：外植体灭菌及初代培养 教学内容 一、无菌操作 要建立初代培养，操作技术亦十分重要，无菌操作快，动作熟练，缩短可能污染的时间。接种室的清洁和消毒，接种前半小时，可用75%酒精或新洁尔灭喷洒，地板用湿拖把拖刷。超净工作台在接种前用95%酒精揩抹工作台面和有关用具，并先开机鼓风15分钟后才能使用。 二、培养基 甘蔗梢部幼叶培养基常用MS和N6两种培养基根据实际情况适当调整。诱导培养基：MS+2，4-D0.5~3 Mg/L+3%蔗糖+0.6%琼脂(PH5.8~6.0)继代培养基与诱导相同。 三、外植体的选择、分离： 四、外植体的灭菌 在超净工作台上将0.1%HgCl2溶液倒入装有嫩叶鞘片段的烧杯内灭菌10分钟，用无菌水将嫩叶鞘冲洗三次。 五、外植体的接种与培养 注意事项： （1） 若是试管，应在酒精灯火焰上封口，接种迅速避免烧伤材料，若是培养瓶，拧开盖子，迅速将材料放入。 （2） 每接一瓶，用具都应用95%酒精棉球擦并在火焰上烧灼，避免交叉污染。 （3） 操作结束，整理，清洁干净用具。 2、教学目标 （1）了解植物组织培养所需要的环境条件 （2）熟悉接种操作步骤 （3）掌握接种操作方法 实验项目3：植物快速繁殖 教学内容 培养基： MS+NAA0.5~5+KT0.5~5+3%蔗糖+0.8%琼脂（PH5.8~6.0） 二、外植体取材，分离： 从无病虫的优良材料切取幼嫩茎段，用自来水冲洗干净。 三、接种： 在无菌条件下，把茎段切成一个节长约1cm的带腋芽小段接种入培养基上培养，放入培养室内，获无菌腋芽苗。 2、教学目标 （1）了解植物快速繁殖的基本原理，通过组织培养诱导腋芽的增殖是植物快速繁殖的一个有效途径。 （2）熟悉植物快速繁殖的操作过程。 （3）掌握快速植物快速繁殖的一系列操作方法。 实验项目4：植物组培苗生根培养 1、实验内容 一、不定根形成，其中激素起决定性作用，生长素却能促进生根，一般赤霉素、细胞分裂素、乙烯通常利于生根，如与生长素配合，一般其浓度均低于生长素浓度，脱落酸（ABA）可能有助于生根。 二、近年来为促进试管苗的生根，改变了通常将激素预先添加