仪器分析讲稿-.ppt

第三十一页，共八十八页。 二、液-固吸附色谱法固定相 目前较常用5-10μm的硅胶微粒（全多孔型）. 三、离子交换色谱法固定相 1.薄膜型离子交换树脂，以薄壳玻珠为担体，表面涂1%离子交换树脂. 2.离子交换键合固定相：用化学反应将离子交换基团键合在惰性担体表面。 a.键合薄壳型：担体，薄壳玻珠； b.键合微粒担体型：担体，微粒硅胶. 四、排阻色谱法固定相 a.软质凝胶：葡萄糖凝胶；琼脂糖凝胶；(水流动相,常压) b.半硬质凝胶：交联聚苯乙烯凝胶；(有机溶剂，较高压) c.硬质凝胶：多孔硅胶；多孔玻珠；(高速) 第三十二页，共八十八页。 §3.5 液相色谱法流动相 1.重要性：GC载气仅三四种，要提高柱效选择性，主要是改变固定相的性质； LC则不同，当固定相选定时，流动相的种类，配比能显著地影响分离效果，因此流动相的选择很重要。 2.选择流动相应注意的因素79/2：5点， 第三十三页，共八十八页。 选择流动相的注意因素： （1）流动相的纯度：一般是采用分析纯试剂，必要时需进一步纯化，以除去干扰的杂质。 （2）应避免使用会引起柱效损失或保留值特性变化的溶剂。（固定相不能吸附溶剂或与流动相互溶。） （3）对试样要有适宜的溶解度，否则会在柱头易产生沉淀。 （4）溶剂的粘度小些为好，否则会降低试样组分的扩散系数，造成传质速率缓慢，柱效下降。 （5）应柱检测器相匹配　（溶剂不能被相应的检测器检测出来） 第三十四页，共八十八页。 3.溶剂的选择79/-3： a. 依据：溶剂的极性是重要依据。 b.溶剂极性顺序，水最大，煤油最小。 c.采用多元组合溶剂系统作为流动相（底液和洗脱液）（底剂决定基本的色谱分离情况；洗脱剂则调节试样组分的滞留并对几个具有选择性的分离作用） d.根据不同的方法选择合适的底液和洗脱液 第三十五页，共八十八页。 选用溶剂的依据：溶剂的极性。 正相色谱：底剂（弱极性）＋洗脱剂（极性较强） 反相色谱：水（主体）＋有机溶剂调节剂。 离子交换色谱：组分保留值通过流动相的离子强度（盐的浓度）和pH来控制。增加盐的浓度，保留值降低；阳离子交换柱流动相pH增加，保留值增加，阴离子交换柱相反。 排阻色谱：所用的溶剂必须与凝胶本身非常相似，这样才能润湿凝胶并防止吸附作用。 第三十六页，共八十八页。 §3-6 高效液相色谱仪 high performance liquid chromatograph 第三十七页，共八十八页。 液相色谱仪（2） 第三十八页，共八十八页。 液相色谱仪（3） 第三十九页，共八十八页。 液相色谱仪（4） 第四十页，共八十八页。 §3.6 高效液相色谱仪 一、概述80/1：高效液相色谱仪一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置、进样器、色谱柱、检测器、恒温器、记录仪等主要部件。 二、结构示意图，fig3-4. 三、部件介绍 1.高压泵（压力150 ～350×105 Pa） 要求： a.流量要稳定；80/-1 b.压力平稳无脉动；81/2. c.对流速要有一定的可调范围.81/4. 动画 第四十一页，共八十八页。 类型： a .往复式柱塞泵—是目前广泛使用的恒流泵. 机理 特点81/-2;6: 1)不受整个色谱体系中其余部分阻力稍有变化的影响，连续供给恒定体积的流动相； 2）可方便地通过改变柱塞冲程的大小或往复的频率来调节流量； 3）由于死体积小（约0.1mL），更换溶剂方便，很适用于梯度洗提. 不足： 1）输出有脉冲波动，会干扰检测器正常工作；2）由于产生基线噪声而影响检测的灵敏度. 第四十二页，共八十八页。 b.气动放大泵—恒压泵 原理： p1SA = p2SB 其工作原理:这是一种恒压泵。 特点82/-6: 1）能供给无脉冲的稳定流量的输出. 2）液缸体积大，更换流动相不方便； 3）不便于梯度洗提. 4）适合匀浆法填装色谱柱。 第四十三页，共八十八页。 2.梯度洗提（梯度洗脱、梯度淋洗）装置82/ a.作用：与GC 中的程序升温一样.（P22、23） b.定义83/1：所谓梯度洗提，就是载液中含有两种以上不同极性的溶剂，在分离过程中按一定的程序连续改变载液中溶剂的配比和极性，通过载液中极性的变化来改变被分离组分的分离因素，以提高分离效果。应用梯度洗提还可以使分离时间缩短，分辨能力增加，还可提高最小检测量和定量分析的精度。 外梯度（低压梯度）：先混合后输入色谱柱； 内梯度（高压梯度）：先泵入梯度混合室再入色谱柱； 第四十四页，共八十八页。 3.进样装置 a.重要性83/1：进样方式及试样体积对柱效有很大影响.要获