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第三十一页,共八十八页。 二、液-固吸附色谱法固定相 目前较常用5-10μm的硅胶微粒(全多孔型). 三、离子交换色谱法固定相 1.薄膜型离子交换树脂,以薄壳玻珠为担体,表面涂1%离子交换树脂. 2.离子交换键合固定相:用化学反应将离子交换基团键合在惰性担体表面。 a.键合薄壳型:担体,薄壳玻珠; b.键合微粒担体型:担体,微粒硅胶. 四、排阻色谱法固定相 a.软质凝胶:葡萄糖凝胶;琼脂糖凝胶;(水流动相,常压) b.半硬质凝胶:交联聚苯乙烯凝胶;(有机溶剂,较高压) c.硬质凝胶:多孔硅胶;多孔玻珠;(高速) 第三十二页,共八十八页。 §3.5 液相色谱法流动相 1.重要性:GC载气仅三四种,要提高柱效选择性,主要是改变固定相的性质; LC则不同,当固定相选定时,流动相的种类,配比能显著地影响分离效果,因此流动相的选择很重要。 2.选择流动相应注意的因素79/2:5点, 第三十三页,共八十八页。 选择流动相的注意因素: (1)流动相的纯度:一般是采用分析纯试剂,必要时需进一步纯化,以除去干扰的杂质。 (2)应避免使用会引起柱效损失或保留值特性变化的溶剂。(固定相不能吸附溶剂或与流动相互溶。) (3)对试样要有适宜的溶解度,否则会在柱头易产生沉淀。 (4)溶剂的粘度小些为好,否则会降低试样组分的扩散系数,造成传质速率缓慢,柱效下降。 (5)应柱检测器相匹配 (溶剂不能被相应的检测器检测出来) 第三十四页,共八十八页。 3.溶剂的选择79/-3: a. 依据:溶剂的极性是重要依据。 b.溶剂极性顺序,水最大,煤油最小。 c.采用多元组合溶剂系统作为流动相(底液和洗脱液)(底剂决定基本的色谱分离情况;洗脱剂则调节试样组分的滞留并对几个具有选择性的分离作用) d.根据不同的方法选择合适的底液和洗脱液 第三十五页,共八十八页。 选用溶剂的依据:溶剂的极性。 正相色谱:底剂(弱极性)+洗脱剂(极性较强) 反相色谱:水(主体)+有机溶剂调节剂。 离子交换色谱:组分保留值通过流动相的离子强度(盐的浓度)和pH来控制。增加盐的浓度,保留值降低;阳离子交换柱流动相pH增加,保留值增加,阴离子交换柱相反。 排阻色谱:所用的溶剂必须与凝胶本身非常相似,这样才能润湿凝胶并防止吸附作用。 第三十六页,共八十八页。 §3-6 高效液相色谱仪 high performance liquid chromatograph 第三十七页,共八十八页。 液相色谱仪(2) 第三十八页,共八十八页。 液相色谱仪(3) 第三十九页,共八十八页。 液相色谱仪(4) 第四十页,共八十八页。 §3.6 高效液相色谱仪 一、概述80/1:高效液相色谱仪一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置、进样器、色谱柱、检测器、恒温器、记录仪等主要部件。 二、结构示意图,fig3-4. 三、部件介绍 1.高压泵(压力150 ~350×105 Pa) 要求: a.流量要稳定;80/-1 b.压力平稳无脉动;81/2. c.对流速要有一定的可调范围.81/4. 动画 第四十一页,共八十八页。 类型: a .往复式柱塞泵—是目前广泛使用的恒流泵. 机理 特点81/-2;6: 1)不受整个色谱体系中其余部分阻力稍有变化的影响,连续供给恒定体积的流动相; 2)可方便地通过改变柱塞冲程的大小或往复的频率来调节流量; 3)由于死体积小(约0.1mL),更换溶剂方便,很适用于梯度洗提. 不足: 1)输出有脉冲波动,会干扰检测器正常工作;2)由于产生基线噪声而影响检测的灵敏度. 第四十二页,共八十八页。 b.气动放大泵—恒压泵 原理: p1SA = p2SB 其工作原理:这是一种恒压泵。 特点82/-6: 1)能供给无脉冲的稳定流量的输出. 2)液缸体积大,更换流动相不方便; 3)不便于梯度洗提. 4)适合匀浆法填装色谱柱。 第四十三页,共八十八页。 2.梯度洗提(梯度洗脱、梯度淋洗)装置82/ a.作用:与GC 中的程序升温一样.(P22、23) b.定义83/1:所谓梯度洗提,就是载液中含有两种以上不同极性的溶剂,在分离过程中按一定的程序连续改变载液中溶剂的配比和极性,通过载液中极性的变化来改变被分离组分的分离因素,以提高分离效果。应用梯度洗提还可以使分离时间缩短,分辨能力增加,还可提高最小检测量和定量分析的精度。 外梯度(低压梯度):先混合后输入色谱柱; 内梯度(高压梯度):先泵入梯度混合室再入色谱柱; 第四十四页,共八十八页。 3.进样装置 a.重要性83/1:进样方式及试样体积对柱效有很大影响.要获
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