粮油检验谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定时间分辨荧光免疫层析法.pdfVIP

粮油检验 谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定 时间分辨荧光免疫层析法 1 范围 本文件规定了时间分辨荧光免疫层析法测定谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的原理、试剂及材料、仪器 及设备、样品制备、样品测定、结果表述和重复性。 本文件适用于小麦、玉米等谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的快速定量检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 5491 粮食、油料检验 扦样、分样法 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27404 实验室质量控制规范 食品理化检测 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中脱氧雪腐镰刀菌烯醇与含铕-螯合物的聚苯乙烯微球标记的特异性抗体发生结合后，抑制了 层析过程中抗体与硝酸纤维膜检测线上脱氧雪腐镰刀菌烯醇-BSA偶联物的免疫反应，使检测线上荧光 强度降低，通过荧光强度变化和荧光分析仪的内置标准曲线，自动计算出试样中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的 含量。 5 试剂及材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T 6682 中一级水的要求。 5.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇时间分辨荧光免疫层析卡（以下简称检测卡）：性能应满足附录A 的要求， 不同品牌不同批次的检测卡使用前，应按照附录A 进行检测卡性能测定。 5.2 10 µg/mL 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准储备溶液。 5.3 0.1 µg/mL 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准溶液：准确吸取10 µg/mL 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准储备溶液 100 µL 于10 mL 容量瓶中，用水定容。4 ℃可保存3 个月。 5.4 样品稀释液：由荧光检测卡配套提供，或根据产品说明书配制。 5.5 离心管：50 mL 和1.5 mL。 1 6 仪器及设备 6.1 粉碎机：电机转速 ≥ 1000 r/min 。 6.2 分样筛：1 mm 孔径。 6.3 天平：分度值0.01 g 。 6.4 离心机：≥转速4000 r/min 。 6.5 振荡器：转速 ≥ 2500 r/min 。 6.6 计时器。 6.7 时间分辨荧光分析仪：在激发波长为365 nm ± 5 nm，检测波长为615 nm ± 5 nm 条件下测定。 7 样品制备 7.1 扦样与分样 按照GB 5491 执行，在采样过程中，应防止样品污染，取代表性样品不少于500 g。 7.2 样品粉碎 用粉碎机（6.1）将被测样品粉碎至全部通过1 mm 分样筛（6.2 ），充分混合均匀。 7.3 待测溶液制备 用天平 （6.3 ）准确称取粉碎后的样品5.0 g （精确到0.01 g ）于50 mL 离心管（5.5 ）中，加入20 mL 一级水。振荡提取5 min～7 min，静置3 min，过滤或离心得上清液。取450 µL 室温（25 ℃ ± 2 ℃ ）下 的样品稀释液（5.4 ）与50 µL 上清液涡旋混合，此溶液为待测溶液。 注：不同厂家检测卡所用的样品制备方法可能不同，应按照产品使用说明中规定方法进行。 8 样品测定 8.1 将检测卡（5.1 ）从冷藏状态（2 ℃～8 ℃）取出，室温平衡15 min。 8.2 仪器校准：选取测试项目为脱氧雪腐镰刀菌烯醇，准确移取100 µL 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准溶液 （5.3 ）通过样品稀释液稀释10 倍后，加到检测卡加样小孔中，室温孵育 10 min 后，将其放入时间分 辨荧光分析仪（6.7 ）中，点击仪器主界面 “测量”菜单中 “标准测量”按钮，然后按 “是”按钮进行 校准。 8.3 样品检测：准确移取100 µL 待测溶液（7.3 ），加到检测卡加样小孔中，室温孵育10 min 后，将 其放入时间分辨荧光分析仪（6.7 ）中，点击仪器主界面 “测量”菜单进行测量，即可读取样品中脱氧 雪腐镰刀菌烯醇的含量。 注：不同厂家时间分辨荧光分析仪读取界面可能不同，应按照产品使用说明中规定进行。 9 结果表述 试样中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量由时间分辨荧光分析仪自动计算并显示，单位为微克/ 千克 （μg/kg