血红蛋白的提取和分离课件.ppt

2、粗分离血红蛋白溶液： ①过程：将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度离心10 min。 ②试管中溶液层次：4层。 ③分离：用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。 第三十一页，共五十六页，2022年，8月28日 第1层（最上层）：甲苯层（无色透明） 第2层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体） 第3层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色透明液体） 第4层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色） 试管中溶液层次 返回 第三十二页，共五十六页，2022年，8月28日 4.透析血红蛋白 第三十三页，共五十六页，2022年，8月28日 练习巩固 1、随着人类跨入蛋白质组时代，对蛋白质的研究和应用越来越深入，首先要做的一步是 A 弄清各种蛋白质的空间结构 B 弄清各种蛋白质的功能 C 弄清各种蛋白质的合成过程 D 获得高纯度的蛋白质 第三十四页，共五十六页，2022年，8月28日 2、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是 A 调节pH B 维持红细胞的能量供应 C 防止微生物生长 D 防止血液凝固 第三十五页，共五十六页，2022年，8月28日 样品处理 粗 分 离 纯 化 纯度鉴定 血液组成成分 1.洗 涤 红 细 胞 2.释放血红蛋白 3.分离血红蛋白 4.透析血红蛋白 血红蛋白的提取和分离 跳转 第三十六页，共五十六页，2022年，8月28日 纯化－－凝胶色谱操作 1.凝胶色谱柱的制作： 2.凝胶色谱柱的装填： 教材图5－19 3.样品的加入和洗脱 返回 第三十七页，共五十六页，2022年，8月28日 装配好的凝胶柱 色谱柱的制作过程：准备材料→加工橡皮塞→安装色谱柱 第三十八页，共五十六页，2022年，8月28日 第三十九页，共五十六页，2022年，8月28日 （二）凝胶色谱操作 （1）凝胶色谱柱的制作： ①取长40厘米，内径1.6厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。 ②底塞的制作：打孔→挖出凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好，插到玻璃管的一端。 ③顶塞的制作：打孔→安装玻璃管。 ④组装：将上述三者按相应位置组装成一个整体。 ⑤安装其他附属结构。 第四十页，共五十六页，2022年，8月28日 第一页，共五十六页，2022年，8月28日 知识回顾--------有关蛋白质的几个问题： 1、含量　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 2、组成元素　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 3、相对分子质量 4、基本组成单位： 结构简式： 种类： 5、氨基酸连接方式　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 占细胞干重的50％以上，细胞中含量最多的有机物 C、H、O、N 高分子化合物 氨基酸 R H C COOH NH2 脱水缩合 第二页，共五十六页，2022年，8月28日 知识回顾--------有关蛋白质的几个问题： 6、肽键　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 7、分子结构 8、蛋白质多样性的原因： (多样性的根本原因)　　　　　　　　　　 9 、蛋白质的鉴定方法　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 氨基酸 肽链 蛋白质 脱水缩合 盘曲折叠 （n条） CO NH 氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺序变化多端；多肽链的空间结构千差万别 10、生理功能 细胞和生物体的结构物质，是人体发育和组织更新的主要原料，具有运输、调节、免疫、催化等作用，是一切生命活动的主要承担者 双缩脲试剂 第三页，共五十六页，2022年，8月28日 第四页，共五十六页，2022年，8月28日 血红蛋白含有四条肽链,每条肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，血红蛋白因含有血红素而呈红色。 第五页，共五十六页，2022年，8月28日 本课题的主要内容如下： 样品处理 及粗分离 纯 化 纯度鉴定 血红蛋白的提取和分离 方法原理 方法原理 方法原理 方法原理 凝胶色谱法 电 泳 第六页，共五十六页，2022年，8月28日 一、基础知识: 样品处理及粗分离的原理: 1 、分离生物大分子的基本思路是什么？ 2 、不同蛋白质的特性在哪些方面存在差异？ 3 、为什么不用鸡的血红细