手足口病的病原学及实验室检测课件.pptVIP

手足口病的病原学及实验室检测陈立中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家脊灰实验室2010-04-21 手足口病的病原§ 引起手足口病的病毒属于小RNA病毒科肠道病毒属，包括：*柯萨奇病毒A组（Coxasckievirus A, CVA）的 2、4、5、7、9、10、16 型等*B组（Coxasckievirus B, CVB)的1、2、3、4、5 型等；*肠道病毒71型（Human Enterovirus 71, EV71）；*埃可病毒（Echovirus, ECHO）等。§ 其中以EV71及CVA16型较为常见。§ 肠道病毒适合在湿、热的环境下生存与传播，75%酒精和5%来苏不能将其灭活，对乙醚、去氯胆酸盐等不敏感；对紫外线和干燥敏感，各种氧化剂(高锰酸钾、漂白粉等)、甲醛、碘酒以及56℃30分钟可以灭活病毒。病毒在4℃可存活1年，-20℃可长期保存，在外环境中可长期存活。 人肠道病毒感染的一般致病机制口腔/呼吸道进入途径咽喉及下肠胃道传播 飞沫、接触、饮食扁、淋 结道结天染微病毒血症心脏肝脏、胰脏、肾上腺神经系统 呼吸系统 皮肤及黏膜肌肉病毒血症神经系统抗体产生、 病毒血症消失， 病毒感染症状改善 流行病学§ 传染源 患者和隐性感染者。发病前数天，感染者咽部与粪便就可检出病毒，通常以发病后一周内传染性最强。§ 传播途径：可经胃肠道（粪-口途径）传播，也可经呼吸道（飞沫、咳嗽、打喷嚏等）传播，亦可因接触患者口鼻分泌物、皮肤或粘膜疱疹液及被污染的手及物品等造成传播§ 流行：以5岁及以下儿童为主，尤以3岁及以下儿童发病率最高。一般5-7月为发病高峰 实验室诊断——临床诊断病例符合下列条件之一者，即可诊断为实验室确诊病例§ 自咽拭子或咽喉洗液、粪便或肛拭子、脑脊液、疱疹液、血清以及脑、肺、脾、淋巴结等组织标本中分离到人肠道病毒（指包括CVA16和EV71等有明确证据表明可以导致手足口病的人肠道病毒）。§ 自咽拭子或咽喉洗液、粪便或肛拭子等标本中 检测到CVA16 或EV71特异性核酸，或从脑脊液、疱疹液、血清以及脑、肺、脾、淋巴结等组织标本等标本中检测到人肠道病毒（指包括CVA16和EV71等有明确证据表明可以导致手足口病的人肠道病毒）的特异性核酸。 实验室诊断§ 血清标本人肠道病毒型特异性中和抗体滴度≥1∶256，或急性期与恢复期血清肠道病毒特异性中和抗体有4倍或4倍以上的升高 病原学监测要求§ 各省区市卫生行政部门要组织医疗卫生机构开展病原学监测，了解病原动态分布变化。所有重症和死亡病例均需采样。此外，以县（区）为单位，每月最少需采集5例首次就诊的普通病例标本；当月县（区）病例总数少于5例时，全部采样。§ 以省（区、市）为单位,在手足口病流行年份中每年至少采集20对EV71 和10对CVA16感染的手足口病患儿的双份血清,以阐明和分析EV71和CVA16感染后IgG和IgM抗体的动态变化，评价血清学抗体试剂盒的敏感性和特异性。§ 以省（区、市）为单位，每月至少从手足口病病例中分离10株毒株并做血清型别鉴定，鉴定完成后并将毒株及鉴定结果于5个工作日内报送至中国疾病预防控制中心。具备测序条件的省份，可开展VP1基因序列测定和分析，进行基因定型，序列测定完成后将序列结果于5个工作日内报送至中国疾病预防控制中心；不具备测序条件者，将毒株送至中国疾病预防控制中心进行序列测定，中国疾病预防控制中心要于28个工作日内反馈基因定型结果。 中国肠道病毒三级实验室网络1l 肠道病毒分离物基因分型,血清流行病学检测,诊断方法建立国家实验室l 质量控制l 对省级实验室提供技术支持l肠道病毒分离和鉴定31个省级实验室(PCR, ICA, PCR-RFLP, real time PCR）l 对地级实验室的质量控制l对地级实验室提供技术支持331 个地级实验室l RT-PCR, Real time PCR采集标本 标本采集和检测（1）所有重症和死亡病例均要采集标本，可以采集咽拭子、粪便或肛拭子、疱疹液、脑脊液、血清等，死亡病例还可采集脑、肺、肠淋巴结等组织标本。聚集性病例至少要采集2例病例标本开展病原学检测。（2）医疗机构负责样本采集，疾病预防控制机构应指导医疗机构进行相关生物学标本的采集。（3）疾病预防控制机构根据本地的技术能力，对采集的标本开展核酸检测、病毒分离；不具备技术条件时，及时送上级机构进行检测。 标本的选择§ 粪便标本、肛拭子（3日内,5-8g）§ 咽拭子标本(3日内,维持液)§ 血清标本（发病0-3天，14-30天）§ 疱疹液（多个疱疹作为一个标本）§ 脑脊液标本(出现神经系统症状后3天内） 采集标本的种类、保存和运输（一）粪便标本。 采集病人发病3日内的粪便标本，用于病原检测。粪便标本采集量5-8g/份，采集后立即放入无菌采便管内，外表