动物细胞制药课件.pptVIP

Vero：从正常成年非洲绿猴 肾脏分离的。 为贴壁依赖的成纤维细胞， 核型2n=60； 培养基为199培养基， 加5%胎牛血清；用于增殖病毒， 包括多瘤病毒、脊髓灰质炎、 狂犬病毒。 Namalwa：从肯尼亚患有淋巴瘤病 人获取，建成的人的类淋巴母细胞。2.8%的高倍体率，12～14条标记染 色体。单条X，无Y。培养基为RPMI 1640，添加7%胎牛血清。用于生产 α干扰素。 SP2/0-Ag14：通过融合的方法， 从有羊抗红细胞活性的BALB/c 小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞系 P3X63Ag8融合杂交瘤SP2/NL-Ag 亚克隆中分离获得， 能耐受8氮鸟嘌呤 20μg/ml但 在含HAT 选择培养基中不能存活。 通常用培养基为DMEM，添加10%胎 牛血清。用于生产单抗杂交瘤细胞 和抗体。 Sf-9 1983年从亲代IPLB—SF21AE 中克隆形成。亲代细胞从秋粘虫的 蛹卵组织中分离获得。它对苜宿尺 蠖核型多角体病毒和其它杆状病毒 高度敏感。 通常用的培养基为Grace培养基， 添加3.3g/L 水解乳蛋白和3.3g/L 酵母浸液, 10%胎牛血清。用于高 效表达外来蛋白制品。 四、基因工程细胞构建和筛选 在生产中采用更多的更有前景的是 融合细胞及采用基因工程构建的各 种工程细胞。 被用构建工程细胞的动 物细胞有： CHO-dhfr 、BHK-21、 Namalwa、 Vero、 SP2/0、 Sf-9 等细胞。 ⒈真核细胞基因表达载体的构建 使用的载体有两类： ㈠病毒载体 牛痘病毒、腺病毒、逆转录病毒、 杆状病毒 ㈡质粒载体 动物细胞制药 第一节 概 述 细胞学说的建立 组织培养和细胞培养 细胞工程学 第二节动物细胞的形态和生理特点 一、动物细胞的形态 适应功能,形态各异。 离体培养细胞分两类： 贴壁细胞 悬浮细胞 ⒈贴壁细胞 生长须有贴附的支持物表面， 自身分泌或培养基中提供的贴 附因子才能在该表面上生长。 两种形态： 成纤维细胞型 上皮细胞型 ⒉悬浮细胞 生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长。如淋巴细胞。 ⒊兼性贴壁细胞 生长不严格依赖支持物。如中国地鼠卵巢细胞，小鼠L929细胞。 二、动物细胞的生理特点 ⒈ 细胞的分裂周期长 细胞分裂时间为12～48h， 细胞的分裂 周期=间期+分裂期 间期（G1+S+G2） 分裂期（M） G1期：4～6h 合成DNA聚合酶 RNA合成 S期：6～8h DNA合成 G2期：2～5h DNA量加倍, RNA合成 M期：0.5～1h 染色体分裂 细胞代数为细胞分裂次数 传代数表示细胞培养分种传代次数 细胞代数=传代数×分种数/2 X=(logN-logNo)÷log2 X 代数 N 培养最终细胞数 No 培养起始细胞数 倍增时间=培养经过时间÷代数 ⒉细胞生长需贴附于基质,并有接 触抑制现象。 ⒊正常二倍体细胞的生长寿命是 有限的。 原代培养 有限细胞系 无限细胞系 ⒋动物细胞对周围环境十分 敏感; 对理化因素敏感，如： 渗透压、pH、离子浓度、剪切 力、微量元素等。 ⒌动物细胞对培养基要求高 必需氨基酸、维生素、无机盐、 微量元素、葡萄糖、细胞生 长因子、贴壁因子等。 　⒍动物细胞蛋白质的合成途 径和修饰 功能与细菌不同。 动物细胞蛋白质的合成部位： 游离核糖体 粗面内质网的核糖体 游离核糖体合成蛋白质用于 细胞质基质内。 粗面内质网的核糖体合成蛋 白质是分泌的和膜中的整合 蛋白多为糖蛋白。 动物细胞生产药物 缺点:培养条件高、成本贵、产量低。 优点:分泌胞外、纯化方便、翻译 后修饰糖基化，与天然产品一致。 第三节生产用动物细胞的要求和获得 一、生产用动物细胞的要求 原代细胞 二倍体细胞系 转化细胞系 二、生产用动物细胞的获得 ⒈原代细胞 是直接取自动物组织器官,经过粉 碎消化而获得的细胞悬液（109/g）。 需要大量动物，费钱费劳力。 鸡胚细胞、原代兔肾细胞、鼠肾细胞、 淋巴细胞。 ⒉二倍体细胞系 　原代细胞经过传代筛选克隆， 从多种细胞