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实验pH值对唾液淀粉酶活性的 第1页/共21页 实验4 pH值对唾液淀粉酶活性的影响 第2页/共21页 实验目的： 1. 通过实验观察pH对酶促反应的影响。 2. 提高分析问题和动手能力。 第3页/共21页 实验原理 淀粉在淀粉酶催化下水解，其最终产物是麦芽糖和葡萄糖。在水解反应过程中淀粉的分子量逐渐变小，形成若干分子量不等的过渡性产物，称为糊精。向反应系统中加入碘液可检查淀粉的水解程度，淀粉遇碘呈蓝色，麦芽糖对碘不显色。糊精中分子量较大者呈蓝紫色，随糊精的继续水解，对碘呈橙红色。 根据颜色反应，可以了解淀粉被水解的程度。在不同酸碱度下，唾液淀粉酶活性不同，淀粉水解程度也不一样。进而了解pH对酶促反应的影响。 第4页/共21页 实验器材： 【器材】： 10mm×100mm试管、试管架、恒温水浴箱、记号笔、一次性杯子 【试剂】： 1．1%淀粉溶液：配制方法：取可溶性淀粉1克，加5毫升蒸馏水，调成糊状，再加蒸馏水约80毫升，加热，使其溶解，最后用蒸馏水稀释至100毫升，冰箱保存。 2．稀释唾液：同实验3 3．缓冲溶液： 4．碘溶液 取碘化钾2g溶于少量蒸馏水中，再取碘1.27g，完全溶解后加蒸馏水至200ml，贮于棕色瓶中。使用前用水稀释5倍。 第5页/共21页 实验步骤 加入物(ml) 1 2 3 1%淀粉溶液 PＨ5.7缓冲液 PH6.8缓冲液 PH8.0缓冲液 3 3 3 1 0 0 0 1 0 0 0 1 摇匀后37℃恒温水浴中保温5分钟 稀唾液 2 2 2 取三支试管按下表操作： 第6页/共21页 将上面各管摇匀后放入37℃恒温水浴中保温。放置10分钟后取出，分别向各管加入稀碘液1滴，观察3管中颜色的区别，说明pH对酶促反应的影响。 第7页/共21页 实验5 温度对酶促反应的影响 实验目的： 1. 通过实验观察温度对酶促反应的影响。 2. 提高分析问题和动手能力。 实验原理：同实验4。 根据颜色反应，可以了解淀粉被水解的程度。在不同温度，唾液淀粉酶活性不同，淀粉水解程度也不一样。进而了解温度对酶促反应的影响。 第8页/共21页 实验器材： 【器材】： 10mm×100mm试管、试管架、恒温水浴箱、沸水浴、记号笔、一次性杯子 【试剂】： 1．1%淀粉溶液：同实验4 2．稀释唾液：同实验3 3．碘溶液 取碘化钾4g溶于少量蒸馏水中，再取碘2g，完全溶解后加蒸馏水至300ml，贮于棕色瓶中。 第9页/共21页 实验内容与方法： 加入物ml 1 2 3 1% 淀粉溶液 3 3 3 PH6.8缓冲液 1 1 1 摇匀后分别于37、沸水、冰浴5分钟 稀唾液 1 1 1 摇匀后分别于37、沸水、冰浴10分钟 取三支试管按下表操作： 表 温度对酶促反应的影响 取出后，分别向各管加入稀碘液1滴，观察3管中颜色的区别，说明温度对酶促反应的影响。 第10页/共21页 实验6 唾液淀粉酶的活性测定 实验目的： 1. 学习酶活力，酶活力单位，比活力的测定，加深对概念的理解； 2. 学会用3,5-二硝基水杨酸测定还原糖的含量 第11页/共21页 实验原理： 在最适条件下，每分钟催化单位量的底物转化为产物所需的酶量定义为一个活力单位。 酶的比活力：用每mg蛋白质酶活力单位数表示，表示酶的纯度。每隔一段时间测定一次水解的横渡一浓度为纵坐标，时间为横坐标作图，在图上找出开始部分线形好的部分求出斜率。进而求出酶的活力与比活力。 　3,5----二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈现比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。该方法是半微量测糖法，操作简便，快速，杂质干扰较小。 第12页/共21页 实验器材： 【器材】： 10mm×100mm试管、试管架、恒温水浴箱、沸水浴、记号笔、一次性杯子 【试剂】： 1．3,5-二硝基水杨酸试剂（又称DNS试剂）： 甲液：溶解 6.9g结晶酚于15.2ml10％氢氧化钠中，并稀释至69 ml，在此溶