实验二蛋白质的两性反应与等电点测定演示文稿.pptVIP

生物化学与分子生物学实验 实验二蛋白质的两性反应与等电点测定演示文稿 当前第1页\共有20页\编于星期四\17点 了解蛋白质的两性解离性质 掌握测定蛋白质等电点的方法 实验目的 当前第2页\共有20页\编于星期四\17点 P COOH NH2 P COO- NH3+ P COO- NH2 P COOH NH3+ pH=pI +OH- pHpI +H+ +OH- +H+ pHpI 兼性离子 阳离子 阴离子 实验原理 当前第3页\共有20页\编于星期四\17点 在等电点时蛋白质颗粒上的净电荷为零，缺乏同电相斥的因素，蛋白质溶解度最小，最容易析出沉淀 维持蛋白质胶体稳定的因素： 表面电荷、水化膜 当前第4页\共有20页\编于星期四\17点 本实验配制了各种不同pH值的缓冲液，沉淀出现最多的缓冲液pH值即为酪蛋白的等电点 当前第5页\共有20页\编于星期四\17点 实验器材与试剂 大试管、滴管、刻度吸量管 0.5％酪蛋白醋酸钠溶液 0.01％溴甲酚绿指示剂(指示范围: ) 0.02M HCL溶液、 0.02M NaOH溶液 0.01M醋酸溶液、0.10M醋酸溶液、 1.00M醋酸溶液 当前第6页\共有20页\编于星期四\17点 蛋白质的两性反应（1） 实验步骤 取一干净试管 酪蛋白液10滴 溴甲酚绿指示剂3滴 观察溶液颜色 并解释现象 当前第7页\共有20页\编于星期四\17点 蛋白质的两性反应（2） 滴加0.02M HCL溶液 边滴加边混匀 有最大沉淀产生，观察溶液颜色变化 至沉淀消失，观察溶液颜色并解释现象 继续滴加0.02M HCL溶液 边滴加边混匀 当前第8页\共有20页\编于星期四\17点 蛋白质的两性反应（3） 继续滴加0.02M NaOH溶液 边滴加边混匀 有最大沉淀产生，观察溶液颜色变化 至沉淀消失，观察溶液颜色并解释现象 继续滴加0.02M NaOH溶液 边滴加边混匀 当前第9页\共有20页\编于星期四\17点 溶液呈蓝色 蛋白质的两性反应(1) 实验结果 酪蛋白溶液呈碱性 (pH﹥5.4)，使溴甲酚绿指示剂显蓝色 当前第10页\共有20页\编于星期四\17点 [H+] ，沉淀 蛋白质的两性反应(2) 出现最大量沉淀时,说明到达了酪蛋白的等电点 溶液由蓝色变成浅绿色（3.8﹤pH﹤5.4） 当前第11页\共有20页\编于星期四\17点 继续加酸，[H+]继续增大，pH＜pI。酪蛋白所带正电荷不断增加，同电相斥，沉淀溶解 沉淀完全溶解时，溶液显黄色(pH﹤3.8) 当前第12页\共有20页\编于星期四\17点 [OH-] ，沉淀 蛋白质的两性反应(3) 出现最大量沉淀时,说明到达了酪蛋白的等电点 溶液由黄色变成浅绿色（3.8﹤pH﹤5.4） 当前第13页\共有20页\编于星期四\17点 继续加碱，[OH-]继续增大，pH﹥pI。酪蛋白所带负电荷不断增加，同电相斥，沉淀溶解 沉淀完全溶解时，溶液显蓝色(pH﹥5.4) 当前第14页\共有20页\编于星期四\17点 生物化学与分子生物学实验