LC-MS分析早薹对白花前胡根化学成分的影响.docxVIP

? ? LC-MS分析早薹对白花前胡根化学成分的影响 ? ? 陈存武， 韩邦兴 （皖西学院 生物与制药工程学院/植物细胞工程安徽省工程技术研究中心，安徽 六安237012） 前胡为传统中药，始载《名医别录》，列为中品[1]。中国药典规定:中药前胡唯一来源于伞形科前胡属植物白花前胡Peucedanum praeruptorum Dunn的根，具宣散风热，降气祛痰之功[2]。主治风热感冒、上呼吸道感染、咳喘、痰多等证。近年来随着市场需求的增大，白花前胡野生资源日渐枯竭，已开展野生变家种工作[3]。白花前胡为多年生一次性开花植物。野生白花前胡生长3年以上抽薹开花，栽培者第一年进行营养生长，第二年抽薹开花[4]。白花前胡抽薹后根木质化，俗称 “公前胡”，“公前胡”不能药用[5]。因此，现在商品前胡都当年采收[6]。虽然有学者应用HPLC/MS/MS技术鉴定了中药白花前胡成分[7]，但尚无进行早薹对白花前胡根的化学成分影响的研究。作者在前期应用HS-GC-MS技术分析开花对白花前胡挥发性化学成分影响的基础上[8]，通过液相色谱质谱联用（LC-MS）技术分析早薹对白花前胡非挥发性化学成分的影响，以期阐明早薹前胡不能药用的原因，为临床应用提供参考。 1 材料与方法 1.1 实验材料 早薹与未早薹白花前胡采自安徽省宁国市同一地块，经安徽中医学院王德群教授鉴定为伞形科植物白花前胡P.praeruptorum Dunn的根。 1.2 实验仪器 日本岛津LC-MS 2010 EV单四极杆质谱检测系统，SPD 10 A检测器。 1.3 实验方法 1.3.1 样品溶液制备 精密称取白花前胡根粉末0.5 g，置具塞锥形瓶中；精密加入三氯甲烷25 mL，称定质量，超声处理10 min，放置5 min后，再称定其质量，用三氯甲烷补足减失的质量，摇匀，滤过；精密量取滤液5 mL，蒸干，蒸干后残留物加甲醇溶解20 min后转移至25 mL的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试样品溶液[2]。 1.3.2 液相色谱条件 流动相为v（甲醇）∶v（水）=75∶25，色谱柱为 KF-C18（4.6×150 nm，7 μm），检测波长为321 nm，体积流量1.0 mL/min，柱温为室温[2]。 1.3.3 质谱条件 液质联用时，进质谱仪的体积流量为400 μL/min。根据预实验结果，ESI采用阳离子模式，质谱条件如下:鞘气压力60 arb，辅助气压力20 arb，毛细管温度280℃，毛细管电压4.5 V[7]。 2 结果与分析 2.1 LC-MS图谱分析 白花前胡样品在上述分析条件下得到HPLC和TIC图，如图1所示。根据质谱图数据、各峰保留时间，以及文献资料[7]比对来确定各化合物，峰面积归一法计算各化合物相对含量，见表1。 由表1可知，早薹前后白花前胡主要成分种类没有发生变化，均含Pd-Ⅰb、PeucedanumarinⅡ、白花前胡甲素、PeucedanumarinⅠ、白花前胡丁素、Pareruptorin E等6种成分，各峰面积之和占总峰面积92%左右，其中，未早薹野生前胡高达97.9%。 图1 白花前胡HPLC和TIC图Fig.1 HPLC and TIC of P.praeruptorum 表1 白花前胡部分峰保留时间、相对含量及鉴定的化合物Table 1 reserve time and conposition of Peucedanum praeruptorum 2.2 各成分之间的比例关系与分析 各前胡样品分别以Pd-Ⅰb的相对含量为1，则上述6种成分之间的含量比例关系如表2所示。可以看出，早薹使得各成分之间的比例关系发生了明显变化。白花前胡甲素、PeucedanumarinⅠ和Pareruptorin E比例均下降，白花前胡丁素的比例上升。 Pd-Ⅰb和白花前胡甲素的比例 （下同，均以Pd-Ⅰb为1）由栽培未早薹者的1∶32下降到早薹者的1∶18，由野生未早薹者的1∶62下降到早薹者的1∶36；同时，野生样品的白花前胡甲素的平均比例为1∶49，远高于栽培者的 1∶25。 白花前胡丁素由栽培未早薹者的1∶16上升到早薹者的1∶34，由野生未早薹者的1∶20上升到早薹者的1∶46；同时，野生样品的白花前胡甲素的平均比例为 1∶33，高于栽培者的 1∶25。 PeucedanumarinⅠ和Pareruptorin E与白花前胡甲素有类似的比例变化规律，但变化不甚剧烈。 表2 白花前胡部分成分的比例Table 2 Chemical composition of P.praeruptorum 3 结语 实验中以HPLC-MS技术分析了早薹对前胡化学成分的影响，并探讨了野生与栽培前胡的化学成分含量比例差异。研究结果表明:所有前胡样品均含 Pd-Ⅰb、