PLL-USPION-PMSCs分子探针靶向探测结直肠癌的MRI在体示踪研究.docxVIP

? ? PLL-USPION-PMSCs分子探针靶向探测结直肠癌的MRI在体示踪研究 ? ? 何花，王芳，王一帆，郭玉林* 1.宁夏医科大学总医院放射科，宁夏 银川 750004；2.中国人民解放军西部战区总医院，四川 成都 610000； *通信作者 郭玉林 guoyulin66@163.com 结直肠癌是全球最常见的消化系统恶性肿瘤之一，早期有效的诊断和及时的根治性治疗是延长患者生存期的唯一方法。目前对于结直肠癌的发病机制已深入至分子水平。间充质干细胞是具有多向分化潜能的成体干细胞，可以靶向迁移到受损组织、炎症区域及肿瘤部位[1-2]，目前在骨关节炎、股骨头坏死、烧伤组织的修复、肿瘤血管生成等方面的研究均取得了突破性的进展[3-6]，但在大多数研究中，间充质干细胞来源于骨髓。本研究采用人胎盘间充质干细胞（placental mesenchymal stem cells，PMSCs）对结直肠癌的作用进行研究，胎盘组织作为胎儿附属物，来源丰富，无伦理限制，可以在临床研究中得到广泛应用。MRI组织分辨率高，在进行多参数、多序列成像的同时可获得清晰的解剖结构及生理动态变化信息，是临床诊断结直肠癌的重要途径[7-9]。本研究利用多聚赖氨酸-超微、超顺磁氧化纳米铁颗粒蛋白复合物-人胎盘间充质干细胞（polylysine-ultramicro and superparamagnetic oxide nano-iron particle protein complexes and human PMSCs，PLL-USPION-PMSCs）分子探针靶向结直肠癌小鼠模型，活体动态观察其行分子成像的可行性，通过监测移植瘤内信号和成像参数的变化，以病理及免疫组化结果为标准，进行PMSCs与结直肠癌的相关研究。 1 材料与方法 1.1 PLL-USPION-PMSCs分子探针的构建 培养第3代人PMSCs（宁夏医科大学总医院干细胞研究所赠予），调整细胞浓度为3×106个/ml，PBS中检测细胞表面标志物的阳性表达率。将USPION与PLL按1∶0.03的体积形成PLL-USPION复合物后对PMSCs进行磁化标记，检测标记后的细胞生物学特性：标记率测定（铁标记率=蓝染细胞数/镜下细胞总数×100%）、以台盼蓝拒染率计算细胞活力、CCK-8试剂盒判断细胞增殖能力、采用Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡率。 1.2 BALB/c裸鼠移植瘤模型建立及分组 选取20只4～6周龄健康雌性BALB/c裸鼠[购于北京维通利华公司，许可证号：SCXK（京）2016-0006]，饲养于宁夏医科大学动物中心SPF级实验室，体重18～22 g。PBS重悬HT-29细胞（人结直肠癌细胞，购于上海汉恒生物，细胞浓度约1×107个/ml），以100 μl/只接种于裸鼠右侧腹股沟皮下，约14 d后待肿瘤直径约5 mm时开始实验。将小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只，将重悬磁化标记后的PMSCs（细胞浓度5×106个/ml），以200 μl/只注入实验组荷瘤小鼠瘤内，以同样方法在对照组荷瘤小鼠瘤内注入200 μl不含细胞的PBS，观察两组裸鼠精神状态与移植瘤生长状况。本研究经过宁夏医科大学总医院医学伦理委员会批准（批准号：2015-015）。 1.3 移植瘤模型活体MR分子成像及图像分析 小鼠麻醉后按标准姿势置于动物线圈，使裸鼠移植瘤中心、线圈中心及磁场中心保持一致，扫描前通过VIP3000麻醉机以6.0 ml/h异氟烷对小鼠进行诱导麻醉，进入深度麻醉状态时以2.25 ml/h进行持续麻醉，采用Philips公司3.0T MR仪、小动物线圈进行扫描。扫描序列：T2WI、T2mapping、T2*mapping，轴位扫描，层厚2 mm，层间距0.2 mm。T2WI：TR 2 000 ms，TE 140 ms，回波链长15，翻转角150°，视野 35 mm×35 mm，采集矩阵176×176；T2 mapping：TR 2 000ms，TE n*13 ms，分别为13、26、39、52、65、78 ms 6个回波，翻转角90°，视野50 mm×50 mm，采集矩阵124×124；T2*mapping：TR 28 ms，TE n*3 ms，分别为3、8、12、16、20、24 ms 6个回波，翻转角20°，视野30 mm×30 mm，矩阵100×96。分别于注射PMSCs前、注射PMSCs后1、3、7、10、14 d进行3.0T MRI，观察移植瘤内PMSCs的信号分布、变化特征，测量实验组与对照组肿瘤的大小：长径（a）、短径（b），计算肿瘤体积：V=1/2ab2，绘制生长曲线。 1.4 病理组织标本获取及免疫组化染色 注射PMSCs后2 d随机处死实验组