荚膜唾液酸对猪链球菌激活巨噬细胞TLR2-AKT-NF-κB信号通路影响的研究.docxVIP

微生物学通报 Microbiology China tongbao@ Jun. 20, 2013, 40(6): 1058? 1067 ? 2013 by Institute of Microbiology, CAS 研究报告 研究报告 荚膜唾液酸对猪链球菌激活巨噬细胞 TLR2-AKT-NF-κB 信号通路影响的研究 朱静 1,2 胡丹 2 刘丽娜 2 张锦海 2 张凤玉 1,2 郝丽娜 2 耿美玲 2 郑峰 2 朱进 2 潘秀珍 2 王长军 1,2* (1. 南京医科大学 基础医学院 江苏 南京 210029) (2. 南京军区军事医学研究所 江苏 南京 210002) 摘 要: 【目的】探索猪链球菌 2 型感染后单核/巨噬细胞启动信号转导通路机制, 探讨 荚膜唾液酸对细菌激活巨噬细胞 TLR2-AKT-NF-κB 信号通路的影响。【方法】以小鼠巨噬 细胞系 RAW264.7 细胞为研究对象, 采用 RT-PCR、Western blotting、免疫荧光和 ELISA 法分别检测猪链球菌 2 型野毒株、唾液酸缺失突变株、唾液酸回复突变株感染后不同时 间点巨噬细胞 TLR2 mRNA 转录水平、AKT 磷酸化水平、 NF-κB 激活程度以及前炎症因 子 TNF-α 分泌水平; 再分别用 TLR2 阻断剂和 PI-3K 抑制剂预处理巨噬细胞, 检测上述分 子的表达水平。 【结果】唾液酸缺失株可选择性的活化信号转导通路途径。 RT-PCR 结果 表明, 缺失株 TLR2 mRNA 表达水平自 1 h 开始升高, 1.5 h 达高峰后有所下降; Western blotting 显示, 缺失株 TLR2 蛋白表达水平 7 h 达高峰, 9 h 下降; p-AKT 水平 1.5? 5 h 持续 稳定在高峰水平, 7 h 后开始下降; 免疫荧光可见 15 min NF-κB 激活-核转运程度较高; ELISA 结果显示, 10 h 之后 TNF-α 的水平显著高于野生株和回复株。使用 TLR2 阻断剂和 PI-3K 抑制剂, 三菌株通路活化程度均明显受抑制。 【结论】荚膜唾液酸可抑制宿主免疫 细胞 TLR2-AKT-NF-κB 信号通路的激活, 藉此参与细菌逃避宿主的免疫防御作用。 关键词: 猪链球菌 2 型, 巨噬细胞, 荚膜唾液酸, 信号通路 基金项目：国家自然科学基金项目(No.; 江苏省自然科学基金 项目(No. BK2011097, BK2011098) *通讯作者： Tel: 86-25 区: science2008@ 收稿日期：2012-10-25; 接受日期：2012-12-10 朱静等: 荚膜唾液酸对猪链球菌激活巨噬细胞 TLR2-AKT-NF-κB 信号通路影响的研究 1059 Research on the role of capsular sialic acid in Streptococcus suis activate macrophage TLR2-AKT-NF-κB signaling pathway ZHU Jing1,2 HU Dan2 LIU Li-Na2 ZHANG Jin-Hai2 ZHANG Feng-Yu1,2 HAO Li-Na2 GENG Mei-Ling2 ZHENG Feng2 ZHU Jin2 PAN Xiu-Zhen2 WANG Chang-Jun1,2* (1. School of Basic Medical Sciences, Nanjing Medical University, Nanjing, Jiangsu 210029, China) (2. Research Institute for Medicine of Nanjing Command, Nanjing, Jiangsu 210002, China) Abstract: [Objective] To explore the mechanism of signaling pathways Streptococcus suis serotype 2 infected monocytes/macrophages leaded, discuss the role