不同品种药用菊花绿原酸和黄酮类溶出规律的研究.docxVIP

? ? 不同品种药用菊花绿原酸和黄酮类溶出规律的研究 ? ? 贾国梁1 杨 茜2 【摘 要】目的：通过建立HPLC法测定3种菊花中2种有效成分，并用此方法探讨有效成分的溶出规律。方法：采用Hypersil BOS C18 色谱柱（4.6×250 mm，5 ?m）；以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，流速为1.0 ml/min；柱温为25 ℃；紫外-可见光检测器，检测波长为210 nm。结果：在20min 内菊花中绿原酸和黄芩苷能与其他成分完全分离，绿原酸先溶出。结论：本实验采用HPLC法，对绿原酸和黄芩苷的分离效果好，灵敏度高，准确，可用于多种菊花样品的分析测定。 【Key】HPLC；菊花；溶出规律 菊花（Flos Chrysanthemi）为菊科植物菊（Chrysanthemum morifolium Ramat）的头状花序，具有疏风清热、明目解毒的功效，主要治疗头痛、眩晕、目赤、心胸烦热、疔疮、肿毒等症。黄酮类化合物为菊花最主要的有效成分之一，在生命科学，制药，食品等领域都具有非常重要的意义[1-2]。目前文献报道[3-5]的菊花的黄酮主要有：香叶木素、木犀草素、芹菜素、香叶木素7-O-β-D葡萄糖苷、木犀草素7-O-β-D葡萄糖苷、金合欢素7-O-β-D葡萄糖苷、刺槐苷、金合欢素7-O-（6-O-乙酰）-β-D葡萄糖苷、金合欢素；多酚类化合物主要为绿原酸。 本研究采用水煎煮法对不同煎煮时间点的不同品种菊花中主要活性物质进行提取，利用高效液相色谱法（HPLC）检测菊花中黄芩苷及绿原酸的含量，进一步将各个时间点的溶出含量绘制成曲线，通过比较分析得出菊花的最优煎煮时间，得出菊花的溶出规律，为菊花科学使用提供实验参考依据。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 Waters e2695D alliance液相色譜仪；AB135-S型分析天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）；Waters 1525 二元梯度泵；KQ5200B 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）； 1.2 试剂 绿原酸对照品购自中国食品药品检定研究院（批号为110753-200413），菊花购于浙江中医药大学饮片厂；乙腈（色谱纯，美国TEDIA有限公司）；磷酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；去离子水（18.2MΩ） 2 实验方法 2.1 色谱条件及系统适用性试验 色谱柱：Hypersil BOS C18 色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈（A）︰0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脱，0～55min（90%～75%），55～75min（75%～60%），75～76min（60%～90%）；检测器：紫外-可见光检测器；检测波长（λ）：210nm； 柱温：25℃，流速：1mL/min；结果表明，在此色谱条件下，样品分离效果好，其它成分对绿原酸和黄芩苷的测定无干扰，理论塔板数按绿原酸和黄芩苷计，均不低于3000。 2.2 对照品溶液的制备： 精密称取绿原酸对照品3.2mg，精密称取黄芩苷对照品2.06mg，分别置于2mL棕色容量瓶，甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品一级母液；取绿原酸一级母液1mL（以及黄芩苷一级母液1mL），于10mL容量瓶，甲醇稀释至刻度，既得对照品混合母液，置于冰箱保存备用。临用前将对照品混合母液按不同比例稀释（稀释1、2、4、8、16、32倍），得到绿原酸质量浓度为160?g/mL、80?g/mL、40?g/mL、20?g/mL、10?g/mL、5?g/mL，及黄芩苷质量浓度为103.00?g/mL、51.50?g/mL、25.75?g/mL、12.88?g/mL、6.49?g/mL、3.24?g/mL的系列对照品溶液，过0.45?m微孔滤膜，收集续滤液于液相进样瓶中待进样。 2.3 供试品溶液的制备： 称取3g不同产地菊花样品，分别置于1000mL烧杯，各加入400mL蒸馏水，加盖，电炉加热（先武火至沸，后用文火保持微沸），沸腾后立即取样（记为0min），分别于0min，1min，2min，3min，5min，10min，15min，20min，30min，40min各取样一次。每次取样1mL，同时向烧杯中补入1mL等量开水并记录汤液量。样品溶液过0.45?m微孔滤膜，取续滤液，即得供试品溶液。 3 实验结果及方法学考察 3.1 实验结果 根据上述的操作步骤，得到菊花绿原酸和黄芩苷色谱图。下图1为标准样品色谱图，图2为各个供试品菊花水煎液的色谱图。 图1 标准品色谱图 1 绿原酸 2 黄芩苷 图2 单煎（20min样品）A 贡菊 B 滁菊 C 杭白菊 1 绿原酸 2黄芩苷 3.2 线性关系试验： 精密吸取对照品溶液，按上述“2.1”项下色谱条件进行测定，每次进样10?L，重复3次，以峰面积Y为纵坐