不同品种葡萄枝蔓中原花青素含量及其活性的比较研究.docxVIP

? ? 不同品种葡萄枝蔓中原花青素含量及其活性的比较研究 ? ? 毛雪，贾孟军，刘玉梅* （新疆大学化学化工学院，新疆乌鲁木齐830046） 不同品种葡萄枝蔓中原花青素含量及其活性的比较研究 毛雪，贾孟军，刘玉梅* （新疆大学化学化工学院，新疆乌鲁木齐830046） 以不同品种葡萄枝蔓为原料提取其中的原花青素并进行分离纯化，同时采用清除自由基的方法评价得到的高、低聚原花青素的抗氧化活性。结果表明：各品种葡萄枝蔓中原花青素的总含量为36.81～68.49 mg/g；其中，低聚原花青素的含量在9.75～16.87 mg/g之间，高聚原花青素含量在13.56～26.04 mg/g之间。各提取物的抗氧化活性研究表明，高、低聚原花青素都有较强的抗氧化活性。通过显著性分析发现，当原花青素质量浓度为0.02 mg/mL时，其对DPPH自由基的清除能力与葡萄枝蔓的品种有关，而对羟基自由基的清除能力与原花青素的聚合度有关；当质量浓度提高到0.05 mg/mL时，其对羟基自由基的清除能力也与葡萄枝蔓的品种有关。 葡萄枝蔓；原花青素；抗氧化活性；F检验；SSR检验 原花青素（proanthocyanidin，PC）是植物界中广泛存在的一大类多酚类化合物的总称[1-3]，由不同数量的儿茶素、表儿茶素或没食子酸经C4-C6或C4-C8键缩合而成[4-6]。按照聚合度的不同，一般将二～四聚体称为低聚体，五聚体以上的称为髙聚体[7]。研究证明，原花青素抗氧化活性和清除自由基能力是维生素C（Vitamin C，VC）的20倍、维生素E（Vitamin E，VE）的50倍[8]，并且还具有保护心血管[9]、抗氧化[10]、抗突变、抗癌[11-12]、抗辐射[13]、促进细胞增殖等多种生物学活性[14]，且无毒性，对80多种疾病具有直接或间接的预防和治疗作用[15]，是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天然抗氧化剂之一，在医药[16]、保健和化妆品[17-18]等领域有着广泛用途。 葡萄是多年生藤本植物，在新疆种植面积广泛。在栽培管理中，为了提高葡萄产量和品质，每年都要对枝蔓进行修剪，因此会产生大量的葡萄枝蔓。如何充分利用这些废弃的葡萄枝蔓，提高其附加价值是我们关注的重点。 本研究收集了新疆吐鲁番、玛纳斯两地种植的12种葡萄枝蔓，在对各品种葡萄枝蔓中原花青素的含量进行分析的基础上，进一步采用乙酸乙酯和正丁醇对粗提液进行了分离纯化，获得了初步提纯的低聚、髙聚原花青素两个样品，同时对乙酸乙酯和正丁醇萃取后的残留水相部分（其他物质）也进行了含量分析，并对各部分的提取率进行了计算。对纯化后的不同品种葡萄枝蔓中的高、低聚原花青素，采用2,2-苯基-1-间三硝苯基联肼（1,1-dipheny-2-picry-hydrazy-1，DPPH）自由基和羟基自由基的抗氧化活性体系进行了活性评价，并采用统计分析方法对各品种提取物的抗氧化活性的差异进行了显著性分析，以期为葡萄枝蔓的开发利用提供理论依据。 1　材料与方法 1.1材料与试剂 葡萄枝蔓分别采自新疆吐鲁番（无核白、马奶子葡萄品种）及玛纳斯地区（其余品种），干燥，用前粉碎，过40目筛。 原花青素标准品（含量为95%）：上海源叶生物科技有限公司提供；DPPH：美国Sigma-Aldrich公司；甲醇、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇等（均为分析纯）：国药集团化学试剂有限公司。 1.2仪器与设备 RHP-1000A快速开盖型万能高速粉碎机：永康市荣浩工贸有限公司；BS210S电子天平：德国赛多利斯有限公司；UV-5300PC紫外/可见分光光度计：上海元析仪器有限公司；R201旋转蒸发仪：上海申生科技有限公司；DHG-9075A电热鼓风干燥箱：上海一恒科学仪器有限公司；HH-S4型数显恒温水浴锅：金坛市医疗仪器厂；80-2型离心沉淀器：江苏省金坛市医疗仪器厂；SZ-93自动双重纯水蒸馏器：上海亚荣生化仪器厂。 1.3方法 1.3.1原花青素标准曲线的绘制 准确称取原花青素标准品10.0 mg，用甲醇溶解、定容至10 mL，为储备液。将上述储备液用甲醇稀释配制成质量浓度分别为0.004 8 mg/mL、0.009 5 mg/mL、0.019 0 mg/mL、0.0285mg/mL、0.0380mg/mL、0.0475mg/mL、0.0570mg/mL、0.066 5 mg/mL、0.076 0 mg/mL的系列标准溶液。用甲醇做参比，在波长280 nm条件下用紫外/可见分光光度计测定该系列溶液的吸光度值，绘制标准曲线。 1.3.2样品中原花青素的提取及含量测定 准确称取10.000 0 g过40目筛的葡萄枝蔓样品，加入300 mL体积分数50%的乙醇溶液，在65℃水浴中搅拌提取90 min，抽滤并洗涤，滤渣再次加入300 mL体积分