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基于金钗石斛麦冬提取物的保湿功效评价 中医认为，皮肤干燥、粗糙、无光等问题主要是由于肝肾阴虚、干热症气、肺脾功能丧失以及面部缺乏润养。金钗石斛（Dendrobium nobile）具有滋阴清热、养胃生津、润肺止咳、益肾明目作用，且其气味轻清、甘滋轻灵、补而不腻，可以兼顾脾胃运化水液不足之弊端。麦冬（Ophiopogon japonicas）则能养阴生津、润肺清心，被用于治疗热伤津液等。二者配合，药性协调而平和，滋阴润燥之力更胜。 研究表明，水通道蛋白3 (Aquaporin3,AQP3）负责水、甘油及尿素等物质的运输，其在保持表皮水合作用方面发挥重要作用，AQP表达量的变化、功能缺失可以影响皮肤屏障和导致皮肤干燥、弹性下降等皮肤损伤 笔者通过体外培养永生化人皮肤角质形成细胞（Ha Ca T）、荧光定量PCR的方法对两者及其复配提取物的保湿功效进行研究，为其在化妆品中的应用提供依据。 1 试验部分 1.1 表皮细胞管理策略 金钗石斛、麦冬（上海华宇药业有限公司）；永生化人皮肤角质形成细胞（Ha Ca T，博溪生物科技有限公司）；试验用水为去离子水；Kc Growth表皮细胞培养液（博溪生物科技有限公司）；PBS、MTT、DMSO、RNA提取试剂盒（Takara）；反转录试剂盒（Takara）；荧光染料（Takara）。 CO 1.2 测试方法 1.2.1 金瓣石斛浓缩液的制备 称取金钗石斛100 g，以10倍质量去离子水煎煮提取2次，每次1 h，浓缩处理，加入3倍体积的95%乙醇醇沉，过滤，取沉淀物定容至100 g，即得金钗石斛浓缩液，生药质量浓度1 g/m L；取麦冬100 g，以10倍质量去离子水煎煮提取2次，每次1 h，浓缩，加入3倍体积的95%乙醇醇沉，然后过滤，取滤液定容至100 g，即得麦冬浓缩液，生药质量浓度1 g/m L；称取金钗石斛浓缩液与麦冬浓缩液，以质量比1︰1、4︰3和3︰4复配，得到相对应的金钗石斛麦冬复配提取物，生药质量浓度1 g/m L。 1.2.2 金饰石斛、天麻及其复配提取物的配制 将Ha Ca T细胞接种于培养瓶中，置于37℃、5%（体积分数）CO 取对数生长期细胞消化后接种至96孔板，制备成细胞悬液。按照试验设计，用培养液稀释配制不同质量分数（10%、2%、0.4%、0.08%、0.016%、0.0032%、0.00064%和0.00013%）的金钗石斛、麦冬及其复配提取物。 待细胞铺板率达到40%时进行给药，试验组加入不同浓度金钗石斛、麦冬及其复配提取物，调零孔（空白培养基对照）加入新鲜培养液，每组设3个复孔。培养板放置在37℃、体积分数5%CO 1.2.3 冬及其复配提取物形态学试验浓度 根据实际检测的细胞毒性结果，确定金钗石斛、麦冬及其复配提取物形态学试验浓度。设立给药组与对照组，每组设两个复孔，按相应的接种密度接种细胞至24孔板中，37℃孵箱（体积分数5%CO 1.2.4 哈干因皮肤潮湿而对皮肤移植的分析 将细胞以1.5×10 1.2.5 统计处理比较 试验结果采用“均值±标准差”表示，用Microsoft Excel统计软件进行分析处理。两两比较采用t检验，P0.05表示有显著性差异。实时荧光定量结果采用2 2 结果与讨论 2.1 金瓣石斛/线性早熟-内酰胺提取物的质量分数对细胞活性的影响 取不同质量分数的金钗石斛、麦冬及两者复配提取物分别处理Ha Ca T细胞24 h后，MTT比色法检测细胞活性发现，金钗石斛提取物、质量比1︰1和4︰3的金钗石斛/麦冬复配提取物在质量分数0.4%、0.08%、0.016%、0.003 2%、0.000 64%和0.000 13%时，对细胞活性无影响（P0.05）。麦冬提取物和质量比3︰4的金钗石斛/麦冬复配提取物在质量分数0.08%、0.016%、0.003 2%、0.000 64%和0.000 13%时，对细胞活性无影响（P0.05）。 参考MTT试验结果，选择相应质量分数，进行形态学检测。从图1～图5的试验结果照片可见，金钗石斛、麦冬和3种配比的金钗石斛/麦冬复配提取物均从质量分数0.4%开始，对细胞形态无明显影响，包括细胞的大小、形状结构、数量等均无明显改变。 2.2 金瓣石斛/天麻红外包的保湿功效 基于Ha Ca T细胞活性影响试验结果，选择对Ha Ca T细胞活性和形态均无明显影响的质量分数条件，同时兼顾今后配方中添加应用的可行性，试验最终分别采用质量分数0.1%、0.05%和0.01%处理细胞，对AQP3、FLG和CAS14的m RNA表达量进行测定。 AQP3对皮肤水合及屏障功能也起着重要作用，表皮细胞之间的水通道蛋白构成了细胞间水分输送的主要通路 FLG参与人表皮角质形成细胞终末分化时细胞间交叉联结膜的形成，随着角质细胞成熟脱水