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火炬树芽多糖提取工艺优化研究 火炬树是黄连科的一种属于漆树科的盐属植物。它具有较强的环境适应性，大量的芽和新鲜植物。研究表明，火炬树各部位含有丰富的化学成分，开发利用价值高。果实中富含花青素 作为生物体内广泛存在的物质，多糖的多种生物活性正被逐渐发现，其能够起到抗凝血 1 材料和方法 1.1 火炬树芽粉的制作 火炬树嫩芽：采摘于吉林农业大学校园内。选取2年树龄的火炬树，于6月份采摘10～15 cm长的侧枝芽。于45℃烘箱中烘干至恒重(≤±5%)，待冷却后粉碎成粉末，过40μm孔筛，制成火炬树芽粉。 试剂：石油醚、乙醇、丙酮、乙醚、葡萄糖、苯酚、硫酸：分析纯。 1.2 仪器、仪器和检测方法 DHG-907385-Ⅲ电热恒温鼓风干燥箱、S11-2-1恒温水浴锅：上海新苗医疗机械制造有限公司；FW100高速万能粉碎机：天津市泰斯特仪器有限公司；FA2104A电子天平：上海精天电子仪器有限公司；RE52-98旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂；722E型可见光分光光度计：上海光谱仪器有限公司；Neofuge 23R台式高速冷冻离心机：上海力申科学仪器有限公司；傅里叶变换红外光谱仪IR-Prestuge-21：日本岛津仪器公司。 1.3 测试方法 1.3.1 火炬树芽粉粗多糖提取 利用石油醚对火炬树芽粉进行脱脂。称取脱脂后粉末1.000 g，按照比例加入蒸馏水进行水浴提取后，进行超声辅助提取，合并提取液抽滤并浓缩至20 mL后，加入3倍乙醇沉淀12 h,3 500 r/min离心5 min，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚进行洗涤，将沉淀于60℃烘箱中烘干，得火炬树芽粉粗多糖。 1.3.2 葡萄糖标准品溶液的制备 准确称取20 mg干燥至恒重的葡萄糖标准品，于100 mL容量瓶中加入蒸馏水定容，得葡萄糖标准品溶液。精密称取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL葡萄糖标准品溶液于刻度试管中，蒸馏水定容至2 mL，加入6%苯酚1 mL后，迅速加入浓硫酸5m L，摇匀后静置10 min，并于90℃水浴锅中温浴15 min，之后立即降至室温，于490 nm波长处测定吸光度。以葡萄糖质量浓度为横坐标(x)，吸光度OD值为纵坐标(y)，绘制标准曲线，得到葡萄糖标准曲线为：y=57.571x-0.001 4,R 1.3.3 单因素试验 1.3.3. 液料比对多糖得率的影响 精密称取1.000 g脱脂火炬树芽粉，于70℃水浴锅中浸提2 h，超声时间0.5 h，考察液料比10∶1、15∶1、20∶1、25∶1、30∶1(m L/g)对多糖得率影响。 1.3.3. 提取时间对多糖得率的影响 精密称取1.000 g脱脂火炬树芽粉，按照液料比25∶1(m L/g)加入蒸馏水，在70℃水浴锅提取，超声时间0.5 h，考察提取时间0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 h对多糖得率的影响。 1.3.3. 提取温度对多糖得率的影响 精密称取1.000 g脱脂火炬树芽粉，按照液料比25∶1(m L/g)加入蒸馏水，水浴锅中提取1.5 h，超声辅助提取0.5 h，考察提取温度50、60、70、80、90℃对多糖得率的影响。 1.3.3. 超声时间对多糖得率的影响 精密称取1.000 g脱脂火炬树芽粉，按照液料比25∶1(m L/g)加入蒸馏水，于70℃水浴锅中浸提1.5 h，考察超声时间0、0.5、1、1.5、2 h对多糖得率的影响。 1.3.4 响应面优化试验 采用Box-Behnken模型和响应面分析法，根据液料比、提取时间、提取温度、超声时间4个单因素试验结果，分别选取3个水平为自变量、多糖得率为响应值进行4因素3水平的响应面试验，试验因素及水平见表1。 1.3.5 提取物的红外光谱测试 将水提醇沉所得火炬树芽提取物研磨成粉末，按照1∶100(g/g)比例加入干燥的溴化钾压片，进行红外光谱分析。 1.4 数据的统计分析 通过Design Expert 8.0.6.1软件进行回归分析，得到火炬树芽粉多糖提取的最佳工艺参数。 2 结果与分析 2.1 单因素试验 2.1.1 液料比对多糖得率的影响 由图1可知：液料比在10∶1～25∶1(m L/g)之间时，多糖得率随溶剂用量增大呈明显上升趋势，当液料比为30∶1(mL/g)时，多糖得率有所下降，但下降并不明显。这可能是由于液料比的改变会影响其它杂质溶出，导致多糖得率受到影响。故选择25∶1(mL/g)为最佳提取液料比。 2.1.2 提取时间对多糖得率的影响 由图2可知：随着提取时间的增加，多糖得率呈先上升后下降趋势。在0.5～1.5 h之间，随着提取时间增加，多糖得率增大，这是因为在水提多糖过程中，物料中的糖分子在水分子间隔处不断运动扩散，随着时间的增加，物料向溶剂中扩散动能增大，多糖得率升高 2.1.3 温度对