火炬松松针多糖的超声波辅助提取工艺及其体外抗氧化活性研究.docxVIP

火炬松松针多糖的超声波辅助提取工艺及其体外抗氧化活性研究 火炬松（puustaedal）生长迅速，适应性强。对松毛虫有一定的抵抗力。资源充足，价格低廉，生命所需的养分和养分丰富，能够调节生命活动。这是天然绿色的保健健康食物和药物。现代药理试验研究表明松针提取物具有降血脂、抗炎、抗肿瘤、抗氧化和抗突变等诸多方面的生理活性 1 材料和方法 1.1 苯磺酸盐的合成 火炬松(Pinus taeda L.)松针,11月份采摘于校园,含松针多糖2.043%;无水乙醇、95%乙醇、石油醚、乙醚、丙酮、葡萄糖、浓硫酸、苯酚、1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)、硫酸亚铁、双氧水、水杨酸、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)、过硫酸钾等,均为分析纯。 RAT-5L玻璃反应釜,RE-52AA型旋转蒸发仪,SHZ-Ⅲ型循环真空泵,Q-350B3型高速粉碎机,FA2104V型电子天平,SB3200DTDN超声波清洗仪器,V-5600型可见分光光度计,TDL-5A型低速大容量离心机,ZD-A30普通型真空冷冻干燥机,电热恒温鼓风干燥箱。 1.2 松针提取多年生糖 1.2.2 多糖得率测定 采用苯酚硫酸法制作标准曲线 同样采用苯酚硫酸法测定松针多糖得率。将按1.2.1节方法提取的多糖粗品用蒸馏水复溶,将其定容于100 m L容量瓶内,稀释一定倍数后准确移取1.0 m L采用同上方法测其吸光度(A)。根据下列公式计算出多糖得率: 式中:y—多糖得率,%;n—稀释倍数;m—松叶质量,g。 1.2.3 不同因素对松针多糖得率的影响 采用超声波辅助热水浸提法提取松针多糖,称取3.0 g预处理的松针粉末若干份,固定超声波功率为180 W,在常温下超声波作用一定时间后取出,再用热水浸提,依次比较不同超声波作用时间(10、15、20、25和30 min)、热水浸提时间(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5和3.0 h)、液料比(10∶1、15∶1、20∶1、25∶1、30∶1和35∶1)、热水浸提温度(65、70、75、80、85、90和95℃)对松针多糖得率的影响。在单因素试验基础上,利用Design Expert 8.0.5软件采用中心组合设计方法(BBD)对超声波辅助热水浸提多糖的工艺进行优化,并对模型进行多元回归拟合,以多糖得率为响应值得二元多项回归方程,优选出最佳提取工艺条件。 1.3 体外抗氧化活性测定 将提取的粗品多糖用蒸馏水复溶,采用Sevage法除蛋白5~8次,上清液中残留的有机溶剂充分蒸发后,在蒸馏水4℃条件下透析48 h,冷冻干燥得到除蛋白后多糖,测定其体外抗氧化活性。 1.3.1 dpph自由基dpph的测量能力 参考文献 式中:r 1.3.2 去除氨基酸自由基h的能力测试 参照文献 式中:r 1.3.3 除abt自由基abt 按文献 2 结果与分析 2.1 单一因素对松针糖的得到率的影响 2.1.1 声波辅助提取时间对多糖得率的影响 按1.2.1节操作,预处理后的松针粉30 g,固定超声波功率180 W,液料比20∶1,80℃浸提1 h,考察超声波辅助提取时间对多糖得率的影响(见图1)。由图1(a)可知:在一定范围内,随着超声波作用时间的延长,多糖得率增加,25 min时达到最大值,说明超声波对多糖的溶出作用显著,当继续延长时间多糖得率略下降,可能是因为大分子多糖超声波长时间机械剪切作用下发生断裂,稳定性下降,从而影响其得率,故超声波作用时间不宜过长,选择25 min为最佳。 2.1.2 不同浸提时间对多糖得率影响 条件同2.1.1节,超声波辅助提取25 min,考察浸提时间对多糖得率的影响。如图1(b)所示:随着浸提时间的增加,多糖得率先升高后降低,在1 h时达到最大。这可能是多糖已在超声波作用的过程中不断溶出并向提取液中扩散,当在热水中继续浸提时,由于多糖长时间暴露在温度比较高的环境下,使得部分多糖分解,从而导致得率明显下降,故选择1 h为最佳热水浸提时间。 2.1.3 溶剂对多糖溶出量的影响 条件同2.1.1节,考察液料比对多糖得率的影响,结果见图1(c)。由图1(c)可知:多糖得率随着液料比的增大逐渐增大,达到25∶1(m L∶g)之后基本保持不变,这可能在于溶剂用量影响有效成分的浸出,随着溶剂的增多,多糖的溶出量增大,当溶剂达到一定量时,多糖已基本溶出,其含量随着溶剂的增加不再增加。而液料比过大,后续浓缩时耗能加大,因此,从降低成本、节约能源角度考虑,选择液料比25∶1为最佳。 2.1.4 提取温度对松针多糖得率的影响 条件同2.1.1节,考察热水浸提温度对多糖得率的影响,结果见图1(d)。从图1(d)可看出:随着提取温度的升高,松针多糖得率呈先增后降的趋势,当温度达90℃时,多糖提取得率最高;温度高