桑枝总生物碱的抗糖尿病作用研究.docxVIP

桑枝总生物碱的抗糖尿病作用研究 根据国际糖尿病联盟（idf）的糖尿病概况。 α葡萄糖苷酶抑制剂通过抑制肠黏膜刷状缘糖苷酶活性, 减缓寡糖、双糖水解为单糖的速度, 以降低和延缓餐后血糖的上升。因此, 在调节餐后血糖方面优于其他降糖药物, 能有效延缓糖尿病前期患者向2型糖尿病的发展, 降低糖尿病发病率, 且对糖尿病并发症有很好的预防作用 我国丰富的中草药资源宝库及古籍中记载的多种治疗糖尿病 (消渴症) 方剂, 为探寻传统天然药材资源中的α葡萄糖苷酶抑制剂提供了重要线索。课题组采用体外酶学筛选体系, 评价了数百种中药提取物的糖苷酶抑制活性, 发现桑属系列药材 (特别是桑枝的水提取物) 具有较强的糖苷酶抑制活性 葡萄糖苷酶活性评价 药品、试剂及实验仪器SZ-A为中国医学科学院药物研究所提供, 总生物碱含量53.4%。阿卡波糖 (德国拜耳公司) ;血糖、甘油三酯 (TG) 、胆固醇 (TC) 试剂盒, 中生北控生物科技股份有限公司;糖化血清蛋白测定试剂盒, 南京建成生物工程研究所;链脲霉素 (strep‐tozotocin, STZ) 、α淀粉酶, 购自Sigma公司;葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和四氧嘧啶等其他试剂均为国产分析纯;小鼠超敏胰岛素ELISA试剂盒, ALPCO公司;μ-Quant酶标仪 (美国BIO-TEK公司) ;3-18K型低温高速离心机 (德国Sigma公司) ;HZQ-C空气浴震荡器 (哈尔滨东明医疗仪器厂) ;BS110S天平 (德国Sartorius公司) 。 α葡萄糖苷酶离体酶学活性评价方法蔗糖和麦芽糖在α葡萄糖苷酶的作用下分解为葡萄糖。通过测定反应体系中葡萄糖的生成量, 判断受试样品对蔗糖酶和麦芽糖酶活性的抑制作用。淀粉在淀粉酶的作用下分解, 通过测定反应体系中淀粉的剩余量, 判断受试样品对淀粉酶的抑制活性。酶制备及抑制活性评价体系参考本实验室已建立的方法 糖尿病和糖尿病前期肥胖性胰岛素抵抗动物模型的形成雄性ICR小鼠 (22～24 g) , 雄性SD大鼠 (150～170 g) 均购自北京维通利华生物科技股份有限公司, 许可证号为SCXK (京) 2016-0006;雄性C57BL/6J小鼠 (26～28 g) , 购自北京华阜康生物科技股份有限公司, 许可证号为SCXK (京) 2014-0004;所有动物均饲养于SPF级动物房。所用实验动物模型如下: (1) 四氧嘧啶高血糖小鼠:正常ICR小鼠尾静脉注射四氧嘧啶 (alloxan) 70 mg·kg 单次给药对小鼠蔗糖、淀粉和葡萄糖耐量的影响正常雄性ICR小鼠 (或四氧嘧啶高血糖小鼠) 50只, 按体重 (或血糖) 均分为对照组、阳性药物阿卡波糖组 (Acar, 10 mg·kg 对STZ糖尿病大鼠糖脂代谢的影响链脲霉素糖尿病大鼠50只, 参照血糖和体重均分为5组 (n=10) , 一组饲以高蔗糖饲料作为糖尿病对照组 (Con) , 一组饲以含阿卡波糖的高蔗糖饲料 (Acar, 0.3 g·kg 对糖尿病前期HFC57小鼠糖脂代谢的影响选用空腹血糖在150～180 mg·dL 胰岛素耐量实验 (ITT) 实验当天, 动物禁食4 h, 皮下注射常规胰岛素溶液 (0.4 U·kg 统计学方法采用SPSS 17.0统计软件进行分析, 数据采用 结果 1 sz-a对葡萄糖酶葡萄糖酶、麦芽糖酶和淀粉酶活性的抑制作用 如图1所示, SZ-A抑制蔗糖酶活性的半数抑制浓度 (IC 2 单次给药对小鼠口服蔗糖、淀粉及葡萄糖负荷后血糖水平的影响 为了验证SZ-A的降糖活性和作用机制, 首先以正常ICR小鼠为模型, 观察单次口服给药后, 对蔗糖 (双糖) 、淀粉 (多糖) 及葡萄糖 (单糖) 负荷后血糖水平的影响。 图2A和B所示, SZ-A在10～40 mg·kg 3 单次给药对吡啶血糖小鼠的影响 为进一步验证SZ-A的降血糖作用, 以四氧嘧啶高血糖小鼠为模型, 观察单次口服给药后, 对蔗糖和淀粉负荷后血糖水平的影响。 图3A和B所示, SZ-A在20和40 mg·kg 4 sz-a各剂量组随机血糖的变化 为了考察长期给予SZ-A的抗糖尿病作用, 在链脲霉素高血糖大鼠模型中, 连续给药3周, 监测其对糖脂代谢的影响。根据糖苷酶抑制剂的作用机制及临床用药特点, 采用药物与高蔗糖饲料混合喂养的方式给药。 图4A所示, 给药1周后, SZ-A各剂量组的随机血糖均有所降低 (中剂量组, P0.05) ;给药2周时, 3个剂量组的随机血糖均显著降低 (P0.05, P0.05, P0.01) ;给药3周时, 除随机血糖降低外, 大剂量组的空腹血糖水平也明显降低 (P0.05, 图4B) , 且糖化血清蛋白 (GSP) 水平显著低于Con组 (P0.05, 图4C) , 尿糖含量亦显著减