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ames试验在遗传毒性评价中的应用 细菌回复突变试验，也称为ames试验，是一种检测突变的外部突变性试验，以评估受试物引起的突变可能性。Ames试验周期短、方法相对简单、结果直观明了，被广泛用于药物、食品、化学品和农药的遗传毒性检测。《药物遗传毒性研究技术指导原则》（2018年） 1 鼠伤寒沙门氏菌 《药物遗传毒性研究技术指导原则》和食品、化学品Ames试验标准推荐的菌株组合均为5种：（1）鼠伤寒沙门氏菌TA98;(2）鼠伤寒沙门氏菌TA100;(3）鼠伤寒沙门氏菌TA1535;(4）鼠伤寒沙门氏菌TA1537或TA97或TA97a;(5）鼠伤寒沙门氏菌TA102或大肠埃希杆菌WP2 uvr A或大肠埃希杆菌WP2 uvr A(p KM101）。农药Ames试验标准推荐使用鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102作为4株标准测试菌株，必要时可增加TA1535、TA1537、TA97a、大肠杆菌WP2 uvr A或大肠杆菌WP2 uvr A(p KM101）任一菌株，也可采用上述的菌株组合。 2 识别菌株 2.1 菌株特性鉴定难 《药物遗传毒性研究技术指导原则》（2018年）规定菌株特性鉴定需符合要求，对鉴定项目未详细规定。食品、化学品、农药细菌回复突变试验方法则规定需对菌株进行组氨酸缺陷型（his 2.2 受试菌的确定 《药物遗传毒性研究技术指导原则》（2018年）未提及菌株鉴定的频次。食品Ames试验标准规定每3个月进行一次菌株鉴定，遇到下列情况也应进行菌株鉴定：在收到培养菌株后；当制备一套新的冷冻保存或冰冻干燥菌株时；重新挑选菌株时；使用主平板传代时。化学品规定新获得的或长期保存的菌种，在试验前必须进行菌株鉴定。农药Ames试验标准则规定，下列情况应进行菌株鉴定：在收到培养菌株后；当制备一套新的冷冻保存或冰冻干燥菌株时；当每皿自发回变数不在正常范围时；当对标准诱变剂丧失敏感性时；初次投入使用前。 虽然食品、化学品、农药对菌株的鉴定频次不尽相同，但目的都是为保证试验时菌株特性符合要求。 2.3 鉴定方法 食品、化学品、农药菌株鉴定项目试验方法大致相同，在以下2个项目存在差别。 2.3.1 他 食品、化学品、农药Ames试验标准对菌株his 2.3.2 菌株的鉴定 食品、农药对rfa的鉴定方法是，加热融化营养肉汤琼脂培养基。取菌液0.1 m L移入平板，迅速将营养肉汤琼脂培养基（50℃左右）适量倒入平皿，混匀，平放凝固。将无菌滤纸片1片放入已凝固的培养基平皿中央，在滤纸片上滴加0.1%结晶紫溶液10μL,37℃培养24 h。 化学品对菌株rfa的鉴定方法是，取0.1 m L增菌液加到2 m L 45℃已融化的顶层琼脂中，摇匀后倒在营养肉汤的底层琼脂培养基上，待琼脂凝固后，在平皿中央放一直径为6 mm的圆滤纸，然后将1 mg/m L结晶紫溶液10μL滴在滤纸上，37℃培养24 h。 三者虽然鉴定方法不同，但是判定标准相同，都是观察待测菌株在滤纸片周围能否出现1个透明的抑制圈，若有则说明该菌株具有rfa突变。 3 液中浓度的影响 药物、化学品Ames试验标准中，S9在S9混合液中的浓度一般为5%～30%；食品Ames试验标准中，S9可在4%～30%中确定最适用量；农药Ames试验标准则直接规定S9浓度为10%。 4 培养基的配制 《药物遗传毒性研究技术指导原则》中未说明Ames试验中各种试剂的配制方法。食品、化学品、农药Ames试验标准中对营养肉汤培养基、营养肉汤琼脂培养基、底层培养基、顶层培养基、S9混合液、菌株鉴定所需试剂等配制方法均进行了详细介绍。其中，食品和农药中各种试剂配制方法、各成分的最终浓度或含量基本相同，不同的是食品中辅酶-Ⅱ（氧化型）溶液和葡萄糖-6-磷酸钠盐溶液要求现用现配，农药中则可-20℃以下低温保存。 5 最高剂量试验 药物、食品、化学品、农药Ames试验标准中对最高测试浓度和剂量的选择上是一致的，均规定至少应选用5个可用于结果分析的浓度，最高测试浓度为5 mg/皿或5μL/皿，分别在加和不加S9的条件下进行试验，每个剂量3个平皿。对于最高剂量下的其他剂量的设定，《药物遗传毒性研究技术指导原则》中未提及；食品中规定按等比组距的原则设立剂量间隔，推荐采用 6 溶媒选择原则 《药物遗传毒性研究技术指导原则》（2018年）未提及溶媒的选择原则。食品、化学品、农药对溶媒的选择原则是一样的，溶媒应不与受试物发生反应，对所选菌株和S9没有毒性，没有诱变性。首选蒸馏水，对于不溶于水的受试物可选择其他溶媒，首选DMSO。但对DMSO的用量，食品规定每平皿最高添加量不超过0.1 m L，农药则规定不得超过0.4 m L，化学品未规定。 7 对照和阳性对照 药物、食品、化学品、农药Ames试验标准中，都规定