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黑果腺肋花楸提取物的急性毒性和致突变性研究 黑果林冠层是蔷薇科灌木。由于其高的经济和生态价值，她在20年前在国外首次引进中国。这种水果含有丰富的营养和生物活性物质，具有较强的抗逆性、抗炎性和抗菌性。 1 材料和方法 1.1 测试对象 黑果腺肋花楸果提取物溶液，其主要功效成分为原花青素(含量为2.79%)，拟用于功能性保健食品，由山西某科技公司生产。 1.2 动物饲料和动物房 SPF级健康成年昆明种小鼠，由广西医科大学实验动物中心繁殖，实验动物生产许可证号SCXK(桂)2014-0002，质量合格证号45000300000854、45000300000864。动物饲料由广东省医学实验动物中心生产，生产许可证号SCXK(粤)2013-0002，质量合格证编号44200300016584。动物房为屏障系统，使用许可证号SYXK(桂)2016-0002。动物实验室温度为22～25℃，相对湿度为55%～70%。 1.3 试验消毒 鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97a、TA98、TA100、TA102四种菌株，购于美国MOLTOX公司。 1.4 实验方法 1.4.1 试验前食性测定 采用最大耐受量试验法，选取体质量为18～22 g的昆明种成年小鼠20只，雌、雄性各10只，试验前禁食16 h，不限饮水。采用最大给药量法，按0.02 m L/g给小鼠灌胃黑果腺肋花楸果提取物溶液1次，浓度为20 mg/kg(原花青素的浓度为558 mg/kg)，灌胃后观察、记录小鼠的中毒表现，观察14 d，以半数致死剂量(median lethal dose,LD 1.4.2 试验菌株设置 采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97a、TA98、TA100、TA102四种试验菌株，设8、40、200、1 000、5 000μg/皿5个浓度组，同时设自发回变对照、溶剂对照和阳性诱变剂对照。自发回变对照不加受试物，其余条件相同。采用平板掺入法，将试验菌株增菌液0.1m L、受试溶液0.1 m L，代谢活化组再加入10%S 1.4.3 成年小鼠引进 设2.5、5、10 g/kg 3个浓度组，同时设阴性(溶剂)对照和环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)阳性对照，每组10只25～30g的昆明种成年小鼠，雌、雄性各5只。按0.02 m L/g给小鼠灌胃受试物2次(间隔24 h)，于末次给受试物后6 h处死小鼠，取胸骨骨髓制片，甲醇固定，Giemsa染色，在油镜下观察每只小鼠的1 000个嗜多染红细胞(PCE)，计数含微核的细胞数，计算微核细胞率。同时计数200个嗜多染红细胞，计算嗜多染红细胞与成熟红细胞的比值(PCE/NCE)。 1.4.4 精子畸形试验 剂量及对照组设计同1.4.3项，每组10只25～35 g的昆明种成年雄性小鼠，每天灌胃给受试物1次，连续5 d，于末次给受试物后第30天处死动物，解剖取出两侧附睾，置生理盐水中轻轻将其撕裂、摇晃，过滤取精子制片，伊红染色，在高倍镜下观察每只小鼠的1 000个完整精子，计算精子畸形率。 1.5 畸形率等指标的统计结果 实验动物的体质量、菌落数、微核细胞率、PCE/NCE及精子畸形率等指标的统计结果以xˉ±s表示。骨髓细胞微核试验各组间的微核细胞率的均数比较采用Poisson分布的近似正态法进行统计分析，精子畸形试验各组间的精子畸形率的均数比较采用χ 2 结果 2.1 小鼠的体质量变化 给予黑果腺肋花楸提取物溶液14 d内，未发现小鼠有中毒体征和死亡，小鼠的进食和饮水未见异常，小鼠的体质量增长未受到明显影响，见表1。观察期结束解剖小鼠，肉眼观察心脏、肺脏、肝脏、肾脏、脾脏、胰腺、睾丸、卵巢及胃肠等主要器官组织未见异常。由此可见，该受试物对小鼠的急性经口毒性LD 2.2 细菌回复突变试验 细菌回复突变试验的结果见表2，在加入或不加入S 2.3 ctx对小鼠骨髓细胞微核试验结果 骨髓细胞微核试验的结果见表3，黑果腺肋花楸提取物各剂量组的微核率及PCE/NCE值与阴性对照组接近，差异无统计学意义(P0.05)，各剂量组的PCE/NCE值均不少于阴性对照组的20%，而CTX阳性对照组的微核率则显著高于阴性对照组(P0.01)，提示未见该受试物对小鼠的骨髓细胞有损伤和抑制作用。 2.4 小鼠精子畸形试验 精子畸形试验的结果见表4，黑果腺肋花楸提取物各剂量组的精子畸形率与阴性对照组接近，差异无统计学意义(P0.05)，而CTX阳性对照组的精子畸形率则显著高于阴性对照组(P0.01)，提示未见该受试物对雄性小鼠的精子产生畸变作用。 3 急性毒性试验 黑果腺肋花楸被引进我国种植的时间不长，迄今未见有中毒报道，现有文献尚无黑果腺肋花楸果实、果汁和提取物的任何有害和毒性作用的数据 本研究检测黑果腺肋花楸提取物的急性