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cd19car-细胞治疗成人急性淋巴细胞白血病的研究进展 急性淋巴结出血（i）是成人常见的急性淋巴结出血类型之一，主要分为b-异议和t-拥挤。其中B-ALL最为常见,其发病率约占ALL的85% CRS是由CARs与肿瘤细胞表达的同源抗原结合后T细胞活化引发的 1 数据和方法 数据收集 患者知情同意书 回顾性分析2015年8月至2018年2月到我科接受CD19 CAR-T细胞治疗的复发/难治B-ALL患者23例,诊断标准及疗效判断标准均依据《成人急性B淋巴细胞白血病诊疗指南》2015年版。所有接受CD19 CAR-T细胞治疗的患者对研究内容完全知情,并签署知情同意书,该研究获得医院学术技术委员会和大学生物医学伦理委员会审核批准。同时在美国国家临床实验中心注册备案(NCT,接受CAR-T治疗患者的入组标准及治疗方法,安全性和疗效等已在2018第61届美国血液学年会上发表(/ash/2018/webprogram/Paper110539.html),具体见本课题组已发表的研究摘要 外周血输注后外周血75ml的检测 输注CD19 CAR-T细胞前1 d、输注CD19 CAR-T细胞结束后2 h、输注后3周内早晨空腹、发热时(T38.5℃)、退热后第2天空腹时采集外周血3～5 ml,所有标本均采集至乙二胺四乙酸(Ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)抗凝管保存,后150 r/min离心5 min取血清,置于-80℃保存。 症状、体征 CRS的诊断需满足在输注CAR-T细胞后3周内出现以下4种症状或体征中的至少1种:发热≥38℃;收缩压90 mmHg的低血压;缺氧与动脉血氧饱和度90%;和/或器官毒性的证据 方法 cd19car在t细胞的转染 ①分离PBMC。采集复发难治性B-ALL患者80～120 ml外周血分离PBMC。②将PBMC在抗CD3/CD28单克隆抗体(eBioscience,USA)和IL-2(SL Pharm,Beijing)刺激下短暂培养1～2 d,然后采用慢病毒法将CD19 CAR转染至T细胞后继续扩增培养10～12 d。③ 对CAR-T细胞进行转染率、活性度、病原体等系列检测,质量合格后转入含有人血清白蛋白的100 ml生理盐水的输液袋中,每体重组患者单个疗程回输CAR-T细胞计量为每公斤1×10 ssr-pcr反应蛋白和抗体的表达 其中IL-6、IFN-γ检测23例,IL-10、TNF-α由于标本量少、标本丢失、检测不当等原因实际检测患者共13例,免疫比浊法检测CRP患者23例。CBA法和免疫比浊法具体步骤如下:将人细胞因子标准品,按照1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256梯度稀释。捕获抗体充分振荡混匀,取1 μl/样本加入500 μl Buffer振荡后离心(200 g,5 min)弃上清,加入Bead Biluent 50 μl/样品,吹打混匀反应15 min。标记好样品的管,取50 μl/管上述步骤后再取50 μl/管血清,吹打混匀避光1 h,检测抗体充分振荡混匀,检测抗体 1 μl/样本,再取Detection Diluent 49 μl/样本避光吹打混匀,取50 μl混合好的检测抗体加入样品中(50 μl/样本),吹打混匀避光2 h,加入1 000 μl Wash Buffer 洗液(1 000 μl/样本),吹打混匀(200 g,5 min)离心弃上清,加入 300 μl Wash Buffer 上机检测,根据检测数据绘制标准曲线,并将标本数据与标准曲线拟合,计算出细胞因子浓度。 免疫比浊法C反应蛋白与特异抗体结合。形成不可溶的抗原抗体复合物。SYNCHRON系统按照比例自动把适量体积的样品和试剂分配到一个反应杯中。所用的样品对试剂比例为1∶26。系统将检测340 nm的光吸收变化。此光吸收变化与样品中C 反应蛋白浓度成正比。系统依此并根据一条以单点调整、预先确定的校正曲线计算并给出C 反应蛋白的浓度。 统计分析 采用SPSS16.0软件进行统计学分析,根据数据分布的正态性选择合适的统计方法,呈正态分布的数据,选择 2 结果 一 性别、年龄及复发次数 本研究共入组了23例复发/难治性B-ALL患者。其中男16例,女7例。中位年龄22岁。其中15例复发≤1次,8例复发≥2次。2例患者染色体Ph cd19car-t输注前后胞因子水平的变化 为了分析CD19 CAR-T细胞治疗后患者细胞因子水平变化,我们检测了所有患者在输注CD19 CAR-T细胞前及输注后血清细胞因子水平。所有患者输注CD19 CAR-T细胞后均检测至少3次,标本采集时间点为输注CD19 CAR-T细胞结束后2 h、输注后3周内早晨空腹、发