SN_T 3649-2013饲料中氟喹诺酮类药物含量的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3649---2013饲料中氟喹诺酮类药物含量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法Determination of fluoroquinolones in feedstuff-LC-MS/MS method2013-08-30发布2014-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3649—2013前言本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局。本标准主要起草人：吴映璇、林峰、林海丹、邵琳智。1 SN/T 3649—2013饲料中氟喹诺酮类药物含量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法1范围本标准规定了饲料中恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、单诺沙星、麻保沙星、沙拉沙星、司帕沙星、双氟沙星、奥比沙星、氟罗沙星洛美沙星和依诺沙星的制样液相色谱-质谱/质谱方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中恩诺沙星！环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、单诺沙星、麻保沙星、沙拉沙星、司帕沙星、双氟沙星、奥比沙星、氟罗沙星、洛美沙星和依诺沙星的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最薪版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样3样品制备按GB/T14699.1规定，取有代表性的样品，四分法缩减至约200g，经粉碎，全部过1mm孔筛，混皇中应防止样品受到污染。匀装人磨口瓶中备用。制样操作过程4　方法提要饲料中氟喹诺酮类药物用N,N-二甲基甲酰胺-0.1,mol/L盐酸溶液提取，提取液经OasisHLB固相萃取小柱净化，液相色谱-质谱/质谱法测定，外标法定量。5试剂和材料除特别规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。5.1 乙腈:HPLC级。5.2 甲醇:HPLC级。5.3 N,N-二甲基甲酰胺。5.4 盐酸。5.5 25%氨水。5.6甲酸:HPLC级(纯度≥98%)。5.70.1mol/L盐酸溶液：移取8.3mL盐酸(5.4)至1 000mL容量瓶中,加水至刻度，摇匀备用。5.820%甲醇溶液：移取20mL甲醇(5.2)至100mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀勾备用。5.9氨水-甲醇溶液（1+9）：吸取 10 mL25%氨水(5.5)与90 mL甲醇(5.2)混合。1 SN/T 3649—20135.105 mmol/L甲酸溶液：准确移取 96μL甲酸(5.6)至500 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀备用。5.11定容液：乙腈+甲醇＋5 mmol/L甲酸溶液（2+20＋78）。量取 2 mL乙腈（5.1）、20 mL甲醇(5.2)与78 mL5 mmol/L甲酸溶液(5.10)混合。5.12标准物质：氟喹诺酮类药物的名称、分子式、CAS号、纯度参见附录 A。5.13标准储备液：1000mg/L。分别准确称取适量氟喹诺酮类药物标准品，其中洛美沙星先用少量的水超声溶解，再用甲醇定容至100mL棕色容量瓶，其余的氟喹诺酮类药物先用少量的N,N-二甲基甲酰胺（5.3)超声溶解，再用甲醇定容至100mL棕色容量瓶，一18℃以下避光保存。5.14氟喹诺酮类药物混合标准储备液：50mg/L。分别吸取适量标准储备液（5.13)至50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。该标准储备液于0℃～4℃冰箱中避光保存。5.15氟喹诺酮类药物混合标准中间储备液：1.0mg/L。吸取1mL标准储备液（5.14)放人50ml棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度。该标准储备液于0℃～4℃冰箱中避光保存。5.16标准工作液：根据需要吸取一定量的1.0 mg/L氟喹诺酮类药物混合标准中间储备液（5.15)用空白样品提取液稀释成适当浓度的标准工作液，使用前配制。5.17Oasis HLB 固相萃取柱:200 mg,6 mL,或性能相当者。用前依次以6 mL 甲醇(5.2）、6 ml水活化，保持柱子湿润。6仪器和设备6.1液相色谱-质谱/质谱联用仪，配有电喷雾（ESI)源。6.27高速离心机：转速大于或等于12000r/min。6.3孔筛:孔径1mm。6.4涡旋振荡器。6.5超声波水浴。6.6固相萃取装置。6.7旋转蒸发仪。6.8 0.2 μm 滤膜,有机系。7测定步骤7.1提取称取 1g样品（准确至0.01g)至 50mL 比色管中,加人 10 mL N,N-二甲基甲酰胺（5.3），涡旋振荡2 min，用0.1 mol/L盐酸溶液(5.7)定容至刻