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植物组织中sod、pod和ca酶活性的比较研究 氧气是土壤氧气生长所必需的物质。当植物组织在生长过程中受到外部寒冷、水和干旱等环境的影响时，植物对光能的吸收效率降低，体内的co含量降低。 SOD、POD和CAT在生物学抗性研究中是非常关键的指标, 为了提高植物的活性氧清除系统, 人们采用各种技术试图提高植物的抗逆性。但是, 对于植物组织中SOD、POD、CAT酶提取条件的系统性研究相对较少。因此, 本实验通过探究不同提取条件对植物组织中SOD、POD、C AT酶活性的影响, 为人们提高植物的抗逆性做前期铺垫, 进一步优化从植物组织中提取S O D、P O D和C AT酶的过程, 从而找到能保证酶活性不丧失, 并快速、简便提取植物组织中S O D、P O D、C AT酶的最佳条件, 提高酶活性的测定效率。 本实验采用比色法研究了3种植物不同p H的提取缓冲液、提取温度和提取时间对3种植物 (苹果、大蒜、番茄) 中SOD、POD、CAT酶活性的影响, 希望可以为今后研究植物中这3种抗氧化性酶的相关理论提供参考。 1 材料和方法 1.1 ple番茄、番茄、大蒜和solaumsqum的包装 实验材料选取新鲜、健康的植物, 包括成熟的苹果 (Malus pumila Millapple) 、番茄 (Solanum lycopersicum) 和大蒜 (Allium sativum) 。在做实验之前, 首先需要将它们用保鲜膜包装好, 然后放在—20℃的冰箱中保存, 以用于后续实验。 磷酸缓冲液, 甲硫氨酸溶液, 氮蓝四唑溶液, EDTA-Na 1.2 仪器和检测方法 SP-754紫外分光光度计、ST-16R台式高速冷冻离心机:上海Thermo有限公司;BS 223S型精密电子分析天平:赛多利斯科学仪器有限公司;HH-6数显恒温水浴锅:国华电器有限公司;250D光照培养箱:常州国华电器有限公司。 1.3 试验条件 1.3.1 酶活性的测定 SOD活性常采用核黄素-NBT法测定 1.3.2 酶活性的测定 POD活性常采用愈创木酚法测定 1.3.3 酶活性测定 CAT活性常采用紫外吸收法测定 1.3.4 数据分析和处理 通过Microsoft Excel 2010软件录入数据并作图, 使用SPSS中的Duncan法检测、进行差异显著性检验分析。 2 结果与分析 2.1 不同的提取条件对sod酶活性的影响 2.1.1 不同ph的磷酸缓冲液对sod酶活性的影响 由图1可知, 当提取缓冲液的p H为6.0时, 植物组织中 (大蒜、番茄和苹果) SOD酶的酶活性均不高, 且都显著低于其他2个处理下所测定的酶活性。而对于大蒜和苹果来说, 用p H为7.0或8.0的磷酸缓冲液提取植物组织中的SOD酶时, 两者的酶活性差异不显著;而就番茄而言, 3个不同处理之间均存在显著差异, 但当提取缓冲液的p H为8.0时, SOD的酶活性最高。 2.1.2 其它处理对sod酶活性的影响 由图2可知, 通过室温下研磨 (20℃) 来提取植物组织中的SOD酶时, 酶活性显著低于另外2种处理时的SOD酶活性。而提取温度为—20℃或0℃时, SOD酶活性显著高于在室温下提取的酶活性, 但两者之间差异不显著, 且通常当提取温度为—20℃时, 酶活性最高。因此, 在冰上研磨有利于提高SOD酶的提取效率。 2.1.3 不同提取温度对sod酶活性的影响 由图3可知, 当提取时间为3 min时, SOD酶活性最高, 显著高于提取时间为1 min时的酶活性, 但与提取时间为5 min时的酶活性相比差异不显著。研究表明, 在提取SOD酶的过程中, 仅研磨1 min, 研磨不充分, 提取时间太短, 酶活性不高。而通常对于大部分成熟植物组织而言, 提取3min时酶活性最高, 提取5 min与提取3 min相比, 酶活性没有显著提高。所以, 研磨太长时间意义不大。在提取SOD酶的过程中, 提取时间把握在3min左右最佳, 酶的提取效率最高。 2.2 不同的提取条件对葡萄酶活性的影响 2.2.1 不同处理对叶片酶活性的影响 由图4可知, 当提取缓冲液的p H为7.0时, 3种植物组织中POD酶的酶活性均不高, 且都显著低于其他2个处理下所测定的酶活性。而用p H为6.0或8.0的磷酸缓冲液提取植物组织中的POD酶时, 两者的酶活性差异不显著。但是, 与其他2组处理相比, 当使用p H为8.0的磷酸缓冲液提取时, POD酶的活性最高。 2.2.2 pod酶活性 由图5可知, 通过室温下研磨 (20℃) 来提取植物组织中的POD酶时, 酶活性显著低于另外2种处理时的POD酶活性。而提取温度为—20℃或0℃时, POD酶活性显著高于在室温下提取的酶活性, 但两者之间差异不显著, 且通常当提取温度为—2