克氏原螯虾procam59sclarii蛋白水解肽-金属配合物的制备及抗氧化及营养评价.docxVIP

克氏原螯虾procam59sclarii蛋白水解肽-金属配合物的制备及抗氧化及营养评价 元天竺葵通常被称为小龙虾。这是世界上最广泛的淡水腌制虾，在中国长江中部和底部均有生产。克氏原螯虾营养和食疗价值较高, 近年来国内外需求量不断上升, 致使其养殖总量也逐年增大。2012年, 我国克氏原螯虾总产量为55.48万t, 比2011年增加14.09% 螯虾等甲壳类水产动物抵御外界胁迫因子的最好方法, 是增强机体的免疫功能。由于甲壳类水产动物体液中不含有免疫球蛋白, 因而其免疫主要为非特异性免疫。谢佳磊等 蛋白水解肽可与机体必需微量金属元素结合, 形成蛋白肽-金属配合物 (有机金属化合物) , 其在提高生物体生长繁殖、增强抗病免疫力、调节生理代谢等方面均有重要作用。Gelinsky等 本研究在实验室前期蛋白水解肽-金属配合物制备、抗氧化及营养价值研究基础上 1 材料和方法 1.1 试验虾、仪器和仪器 试验原料:克氏原螯虾, 平均体长5.5±0.2 cm, 平均体重10.2±0.4 g, 于室内水族箱 (100×50×50 cm, 15尾/箱, 水深15 cm, 设置瓦片和树枝为遮蔽物) 内驯养2周后, 挑选健康活泼、体色正常、大小均匀的试验虾种, 进行饲喂试验。带鱼 (Trichiurus lepturus) 加工副产物 (含鱼头、内脏、鱼骨及碎肉等) , 浙江兴业集团有限公司提供。 试验仪器:Free Zone 4.5真空冷冻干燥机, 美国Labconco公司;U-2800紫外分光光度计, 日本Hitachi公司;SHAB恒温水浴振荡器, 常州国华有限公司;MDF-U53V型超低温冰箱, 日本SANYO公司;实验室纳滤膜分离设备, 上海朗极膜分离设备工程有限公司;Kjeltec8400全自动凯氏定氮仪瑞士Foss公司;Soxtec2050全自动索氏抽提仪, 瑞士Foss公司;高速组织捣碎机, 上海精科仪器有限公司;CF16RX型冷冻离心机, 日本日立公司等。 1.2 试验组和处理 1.2.1 紫菜蛋白水解肽的制备 带鱼副产物约20 g, 溶于200 m L去离子水, 调节混合浆液p H值至6.5±0.1, 40℃保温10 min;按20000 U/g比例加入木瓜蛋白酶, 45℃水浴、搅拌酶解8 h;每隔2 h调节体系p H值至6.5±0.1;酶解结束后, 85℃水浴加热10 min, 钝化木瓜蛋白酶;快速冷却至4℃, 5000 r/min离心20 min, 获得中间清液为带鱼蛋白水解肽。将蛋白水解肽溶液以1.0 mol/L Na OH调节p H值至7.0, 按体积的2.0%加入1 mol/L Fe Cl 1.2.2 基础饲料营养水平测定 基础饲料:鱼粉37.0%、豆粕28.0%、大豆油2.5%、鱼油2.5%、玉米粉10.0%、小麦粉15.0%、复合维生素及各种矿质元素3.0%、羧甲基纤维素钠2.0%。经测定, 基础饲料营养水平为粗蛋白28.5%、粗脂肪6.2%、碳水化合物41.9%、粗灰分8.1%。 将以上组分粉碎至60目, 混合均匀, 分别添加0、200、400、600、800、1000 mg/kg TPH-Fe 1.2.3 虾体消毒和投喂 试验分组: (1) 对照组:基础饲料饲喂; (2) TPH-Fe 饲养管理:首先采用3~4%食盐水对螯虾浴洗10min, 进行虾体消毒。试验期间, 控制水体p H 7.8~8.0、温度25±0.2℃;静水连续充氧, 每日定时更换3/4体积水, 并清洁吸污。每天投喂螯虾体重5.0~8.0%饲料, 视情况进行适当调整;每天投喂3次, 采用定时 (06:30、12:30和18:30) 、定点 (分布均匀, 避免争食) 投喂方法, 同时观察螯虾进食、活动状况。饲喂试验为期60 d。 1.3 测试指标的测定 1.3.1 克氏螯虾出肉率 饲养试验第0、30、60 d, 分别将各箱中克氏螯虾计数、称重, 计算成活率、增重率、特定增长率及出肉率 (均为平均值) 。计算公式如下: 1.3.2 肌肉粗蛋白及养殖方法 将螯虾样品称重后置于培养皿中, 65℃烘干, 再在105℃烘箱中烘至恒重, 称重计算干物质含量。螯虾肌肉粗蛋白含量采用全自动凯氏定氮仪测定;粗脂肪含量采全自动索氏抽提仪测定;灰分含量采用GB5009.4-2010《食品中灰分的测定》测定。 1.3.3 血清和肝胰腺组织中抗氧化酶活性测定 饲喂结束后, 从每个组中随机取10尾螯虾, 采用一次性无菌注射器从虾头胸甲刺入心脏, 抽取血液于离心管中, 4℃冰箱中过夜, 5000 r/min离心10 min, 吸取上清液为螯虾血清。采血后鳌虾, 迅速采集肝胰腺组织 (4℃) , 加入9倍质量的预冷无菌生理盐水, 冰浴匀浆, 3000 r/min离心10 min