刺五加总黄酮提取工艺研究.docx

刺五加总黄酮提取工艺研究 传统的中医刺五加在中医临床应用中有着悠久的历史，其中黄酮类化合物具有广泛的药理活性。 机械化学 (mechanochemistry) 最早发源于同生理机能有关的生物化学中机械运动能与化学能的转变, 目前主要指通过挤压、剪切、摩擦等手段, 对物质施加机械能, 从而诱发其物理化学性质变化, 使物质与周围环境中的固体、液体、气体发生化学变化的现象 1 1.1 紫外分光光度计和冷冻干燥机 WZJ (BFM) -6J振动研磨机 (济南倍力粉技术工程有限公司) ;TU-1900双光束紫外可见分光光度计 (北京普析通用仪器有限责任公司) ;FD-ID冷冻干燥机 (北京博医康仪器有限公司) ;标准分样筛 (河南新乡康达新机械有限公司) ;LS100Q激光粒度仪 (美国Beckman Coulter公司) 。 1.2 材料表面 刺五加根及根茎 (购自大连开发区大药房, 产地吉林, 按照《中国药典》鉴定 2 2.1 机械化学法的辅助提取 2.1.1 添加剂的选择 刺五加中黄酮类物质主要为槲皮素及其相关的黄酮苷类化合物 2.1.2 试验溶液的制备 用小型中药粉碎机将刺五加药材粉碎至60目, 60 ℃下干燥3 h备用 (即粗粉, 以下同) 。取粗粉200 g与一定量助剂 (Na 2.1.3 单因素实验 分别考察助剂用量、物料粒度 (D 2.1.4 正交实验 根据单因素试验结果, 作L 2.2 其他提取方法包括试剂溶液的制备 2.2.1 超微粉碎辅助提取 取刺五加粗粉200 g研磨至粒度D 2.2.2 物理混合样品的提取 取超微粉碎后的刺五加粉200 g (D 2.2.3 供试品溶液的制备 精确称取刺五加粗粉5.0 g, 用250 ml, 75%乙醇回流2 h, 离心, 取上清, 沉淀重复提取2次, 合并上清液并浓缩, 得浸膏, 真空干燥, 研碎后加入20 ml, 95%乙醇, 超声充分溶解, 过滤, 滤液作供试品溶液。 2.3 重量测定 2.3.1 对照品液的制备 精密称取120 ℃减压干燥至恒重的芦丁对照品11.3 mg, 2.0 ml无水乙醇溶解, 转入50 ml量瓶中, 用95%乙醇稀释至刻度摇匀, 即得对照品液 (0.226 mg/ml) 。精密吸取该液0, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0 ml, 分别置25 ml容量瓶中, 加水至6 ml, 加5% ( 2.3.2 测定总黄酮含量 准确吸取供试品溶液2.0 ml, 置25 ml容量瓶中, 按“2.3.1”项的方法, 自“加水至6 ml”起依法测定其吸光度, 与标准曲线对照得黄酮质量, 提取率按下式计算: % = % ——提取率; ——经换算后提取液中黄酮质量 ( —— 样品质量 (mg) 。 2.3.3 精密度实验 精确量取供试品溶液5份, 按“2.3.2”项方法分别测定总黄酮含量, 2.3.4 总黄酮含量测定 精确量取已知含量的供试品溶液5份各1 ml, 分别加入1 ml对照品溶液, 按“2.3.2”项方法分别测定总黄酮含量, 回收率均在92.7%～102.0%之间, 平均回收率96.1%, 2.4 统计方法 实验数据采用 3 3.1 不同的预处理方法对全球黄酮提取率的影响。结果如表2所示 刺五加与 3.2 单因素实验 3.2.1 参考图。2.添加剂用量对提取率的影响 助剂的最小用量主要取决于机械化学过程的传质速率及目标提取物的性质, 如提取松针三萜酸时, 为使三萜酸与碱充分作用, 3.2.2 图3显示了材料粒度对提取率的影响 随研磨时间延长, 物料粒度减小, 助剂与目标提取物接触、作用时间越长。粒度由 3.2.3 乙醇浓度对提取率的影响 机械化学法处理后, 刺五加总黄酮在水和稀醇溶液 (20%, 40%乙醇) 中的提取率最高 (平均为1.68%) , 随乙醇浓度增加, 提取率逐渐降低 (P0.05) 。这表明机械化学法可提高刺五加总黄酮在极性溶剂中的溶解性, 进而可用水或稀醇提取。 3.2.4 参考图。5.料溶液比对提取率的影响 随溶剂用量增大, 总黄酮提取率增加, 当料液比小于1∶50 ( 3.2.5 表4显示了提取时间对提取率的影响 机械化学处理后, 刺五加总黄酮可快速溶出。在3～30 3.3 最佳工艺的确定 根据以上单因素实验的结果, 选择 由级差分析可知, 机械化学法辅助提取刺五加总黄酮的最佳工艺为 在优化的工艺条件下进行了3批原料的平行提取, 提取率分别为1.74%, 1.72%, 1.69%, 平均提取率为1.72%。 3.4 总黄酮与热回流提取对比 按正交实验确定的最佳工艺条件提取刺五加总黄酮, 与热回流提取对比, 结果见表6。 机械化学法的提取率比热回流提取高13.2%, 室温下操作, 提取