NY_T 3130-2017生乳中L-羟脯氨酸的测定.pdf

ICS 67.100.10X 16NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3130—2017生乳中L一羟脯氨酸的测定Determination of L-hydroxyproline in raw milk2018-06-01实施2017-12-22 发布中华人民共和国农业部-发布 NY/T3130—2017前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC274）归口。本标准起草单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、农业部奶产品质量安全风险评估实验室（北京）、安徽农业大学、青岛农业大学、安徽省农业科学院畜牧兽医研究所。本标准主要起草人：郑楠、叶巧燕、文芳、李松励、许晓敏、刘萍、甄云鹏、屈雪寅、杨永新、韩荣伟、程建波、张养东、王加启。- NY/T3130—2017生乳中L-羟脯氨酸的测定1范围本标准规定了生乳中-羟脯氨酸的测定方法。本标准适用于生乳中I-羟脯氨酸的测定。本标准检出限为30mg/L。2规范性引用文件下列义件对于本义件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本义件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法第一法分光光度计法3原理样品经酸水解，游离出的L-羟脯氨酸用氯胺T氧化，生成含有吡咯环的氧化物。生成物与对二甲胺基苯甲醛反应生成红色化合物，在波长560nm处测定吸光度，与标准系列比较定量。4试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水为GB/T6682中规定的二级水。4.1盐酸（HCl,p=1.19g/mIL）：优级纯。4.2盐酸溶液(0.02mol/L)：量取盐酸(4.1)1.7mL用水定容至1L,摇匀。4.3缓冲溶液：将50.0g柠檬酸（C.HgO，·H²O)、26.3g氢氧化钠（NaOH）和146.1g乙酸钠（Na),C,H，）溶于水，定容至1L，再依次加人200mL水和300mL正丙醇(CHH)，混勺。4.4氯胺T溶液：将1.41g氯胺T(C,H13CINNaO),S)，溶于10mL水中，依次加人10mL正丙醇和80mI缓冲溶液（4.3)混匀，现用现配。4.5显色剂：称取10.0g对二甲胺基苯甲醛（CgHnNO)，用35mL高氯酸（HCIO)）溶解，缓慢加人65mL异丙醇(C,H12O)混勺,现用现配。4.6氢氧化钠溶液(10mol/L)：准确称量40.0g氢氧化钠，用水溶解冷却后定容至100ml。4.7氢氧化钠溶液(1mol/L)：准确称量4.0g氢氧化钠，用水溶解后定容至100ml。4.8L-羟脯氨酸标准储备液（500mg/L）：准确称取50.0mgL-羟脯氨酸标准品（C,H。NO)3，CAS:5135-4，纯度≥99.0%），用0.02mol/L盐酸溶液（4.2)溶解，定容至100ml。于4℃冰箱内储存，有效期6个月。4.9L-羟脯氨酸标准工作液（5.00mg/L)：准确吸取标准储备液（4.8)1.00ml.于100ml.容量瓶中，用0.02mol/L盐酸溶液（4.2)定容至刻度，现用现配。5仪器5.1分析天平：感量0.1mg。5.2三角瓶：容量100ml，长颈，小口。1 NY/T 3130—20175.3电热恒温干燥箱：士1℃。5.4定性滤纸：直径11cm。5.5容量瓶：50ml、100mL5.6具塞比色管：10ml、25ml。5.7酸度计。5.8恒温水浴锅：土1℃。5.9分光光度计：可调波长560nm。5.10比色皿：光程为1cm。5.11玻璃水解管：配有聚四氟乙烯密封盖。6分析步骤6.1水解样品准确吸取5.00mL混匀的生乳样品于玻璃水解管（5.11)中，加5.00ml盐酸（4.1）摇匀密封后，置于110℃电热恒温干燥箱（5.3)中水解12h（加热1h后取出，轻轻摇动玻璃水解管），取出冷却。摇勺后，打开玻璃水解管，用滤纸（5.4）过滤至100ml容量瓶中，用水反复冲洗玻璃水解管和漏斗，定容至刻度，摇匀。吸取5.00mL～25.00mlL（视水解液中L-羟脯氨酸的含量）水解液于100ml，三角瓶中。用浓度为10mol/L和1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至8.0士0.2,转移到100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，作为试液备用。6.2测定6.2.1标准曲线的绘制准确吸取L-羟脯氨酸标准工作液（4.9)0.00mlL、1.00mlL、2.00ml、4.00mlL、10.00mL和20.00mlL分别置于100ml容量瓶中，用水定容，摇匀。浓度分别为0.00mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.50mg/L和1.00mg/L。取上述不同浓度的溶液各5.00ml，分别加人至25m