DB34T 2997-2017猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作规程.docxVIP

ICS 11.220 B 41 安 徽 省 地 DB34 方 标 准 DB 34/T 2997—2017 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作规程 Protocol of examination for Actinobacillus pleuropneumoniae 文稿版次选择 2017 - 12 - 30 发布 2018 - 01 - 30 实施 安徽省质量技术监督局 发 布 I DB34/T 2997—2017 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位： 安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司、安徽杜洛克种猪育种有限责任公司、颍 上庆丰农牧发展有限公司。 本标准主要起草人： 孙裴、李郁、高亚飞、黄晓慧、崔文竹、魏建忠、殷宗俊、赵顾、张晓东、王 希春。 1 DB34/T 2997—2017 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作规程 1 范围 本标准规定了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的检验的设备和材料、检验程序、操作步骤、与副猪嗜血 杆菌鉴别、结果报告。 本标准适用于猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的检验。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB 4789.28 食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求 GB 14922.2 实验动物 微生物学等级及监测 NY/T 537 猪放线杆菌胸膜肺炎诊断技术 SN/T 1447 猪传染性胸膜肺炎检疫技术规范 3 主要设备和材料 3.1 显微镜：物镜 10 倍~100 倍。 3.2 电子天平：感量 0.1 g。 3.3 恒温培养箱 3.4 冰箱：2℃~5℃， -20℃。 3.5 无菌培养皿：直径 90 mm。 3.6 无菌试管：15 mm×150 mm。 3.7 无菌锥形瓶：容量 250 mL ，500 mL。 3.8 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。 3.9 鸡表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌。 3.10 灭菌棉拭子。 3.11 革兰氏染色液：按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.12 鲜血平板培养基：制备方法见附录 A 中 A.1。 3.13 营养琼脂培养基：按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.14 尿素琼脂培养基：按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.15 改良 TSB 肉汤培养基：制备方法见附录 A 中 A.2。 3.16 改良 TSA 培养基：制备方法见附录 A 中 A.3。 3.17 巧克力琼脂培养基(CA)：制备方法见附录 A 中 A.4。 3.18 改良 PPLO 琼脂培养基(mPPLO)：制备方法见附录 A 中 A.5。 3.19 糖发酵培养基：按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.20 ONPG 培养基：按照 GB 4789.28 的规定执行。 2 DB34/T 2997—2017 3.21 缓冲葡萄糖蛋白胨水：按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.22 蛋白胨水：按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.23 硫酸亚铁琼脂：按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.24 硝酸盐培养基与硝酸盐还原试剂：按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.25 氧化酶试剂：按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.26 Rustigian 氏尿素培养液：按照 GB 4789.28 的规定执行。 3.27 无菌 PBS 溶液：制备方法见附录 A 中 A.6。 4 检验程序 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作程序见图1。 图1 猪传染性胸膜肺炎防线杆菌检验操作程序 5 操作步骤 5.1 采样、运输和保存 5.1.1 病料的采集标准 应符合 SN/T 1447 的相关规定。 3 DB34/T 2997—2017 5.1.2 活体样品采集 用无菌棉拭子伸入鼻腔采集分泌物，放人无菌试管中立即送往实验室供分离。 5.1.3 组织样品的采集 无菌采集具有典型病变的肺脏、肺门淋巴结、扁桃体等器官和鼻腔分泌物， 并在死亡 2 h 内完成。 5.1.4 血样的采集制备 无菌操作采集动物血， 每头不少于 10 mL。自然凝固后无菌分离血清， 分装，加盖密封后 4~8℃ 保存。 5.1.5 样品运送 采集的样品，均应在 4~8℃条件下 24 h 内送到实验室。脏器组织样品采集后延迟送检的，可保 存于饱和氯化钠溶液或 30％甘油缓冲盐水溶液中，保存时间不超过 72 h