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d-半乳糖致衰老模型大鼠学习记忆能力和行为学的变化及中药的干预作用 21世纪，老龄化是全球的社会问题。关于衰老和抗衰老药物的研究已成为世界医学研究的热点。自然衰老机体具有代谢紊乱、免疫功能低下和基因表达与调控功能异常等特征,表现学习记忆功能下降,行动反应迟缓、对新环境适应能力差。我国历代医家对预防衰老研究颇多,其中有效处方共有七十之多,反映了我国古代在抗衰老方面就已经积累了丰富成效。D-半乳糖诱导的亚急性衰老动物模型在国内外已被广泛应用,本实验采用D-半乳糖诱导衰老模型大鼠,观察模型大鼠的行为活动和学习记忆能力的变化,并探讨抗衰老片和首乌延寿片等中药的干预作用。 1 材料和方法 1.1 实验动物中心 SPF级Wistar大鼠,48只,雌雄各半,体重:雌200~220g,雄240~260g,来源:中科院上海实验动物中心/上海斯莱克实验动物公司[SCXK(沪)2007~0005],饲养于浙江中医药大学动物实验研究中心屏障系统内[SYXK(浙)2003~0003]。 1.2 临用前用水溶液 抗衰老片(浸膏粉):批号080320,临用前用蒸馏水溶解至浓度30mg/mL;首乌延寿片:批号为A060801,临用前用蒸馏水溶解至浓度52.5mg/mL。 1.3 主试剂 D-半乳糖,批号上海试剂二厂;戊巴比妥钠,批号:国药集团化学试剂有限公司。 1.4 大鼠活动仪器 AF100雪花状制冰机,美国SCOTSMAN;YLS-1A多功能大鼠活动记录仪,山东省医学科学院设备站;Morris水迷宫系统,西班牙Panlab公司;LM 1000型大小鼠穿梭箱,美国Kinder Scientific公司。 1.5 正常组和对照组的饲养 造模方法参照文献。大鼠适应性饲养1周,按体重随机分为4组:正常组、模型组,抗衰老片组、首乌延寿片组,每组12只,雌雄各6只,按3只/笼饲养,自由饮食。除正常对照组外,其余各组每天一次颈背部皮下注射5%D-半乳糖100mg/kg,正常对照组注射同容积的生理盐水,连续造模7周。同时,抗衰老片组按10mL/kg经口灌胃,给药剂量为300mg/kg,首乌延寿片按10mL/kg经口灌胃,给药剂量为525mg/kg,模型对照组和正常对照组灌胃给予蒸馏水10mL/kg,每日一次,连续给药7周。 1.6 指标报告 1.6.1 自主活动测定 采用大鼠自主活动仪记录自主活动数。实验在微光、微声的环境中,将大鼠放入自主活动桶中,盖上桶盖,使之适应1min,记录大鼠3min内的自主活动数。在造模开始前、造模4周、造模7周,测试各组大鼠自主活动次数。 1.6.2 水迷对大鼠的记忆能力 试验第6周测试。迷宫水池高50cm,直径120cm,站台直径10.0cm,壁上标有A、B、C、D四个入水点,将水迷宫等分成4个象限。迷宫上方有一与计算机相连接摄像机,可利用计算机软件对试验大鼠活动进行全程跟踪,并显示整个活动轨迹。用找到站台所需的时间表示大鼠的学习记忆能力。实验在隔音安静的房间内进行,水温控制在22℃±0.5℃,正式测试前,需一天训练2次,每次训练2 min且每次从不同点将试验大鼠放入水迷宫中,若动物2 min尚未找到站台,将动物拿到站台上并使它在上面停留20s。第3天随机选一下水点进行水迷宫测试。 1.6.3 正式测试方法 实验第45天后开始,每天训练1次,连续3d,第4天进行正式测试。系统参数设为循环次数20次,间隔时间5s,暗示灯时间5s,电击时间10s。记录每只大鼠的遭受电击次数,遭受电击的总时间及逃避潜伏期。 1.6.4 大鼠在5gin内的行为击穿试验 无噪声。将大鼠置于旷场实验箱,每只大鼠观察5min。操作者握住大鼠的尾巴根部1/3处,轻轻将大鼠放入开阔箱的中央格,并开始计时,并用红外摄像系统记录大鼠的运动轨迹,并由计算机自动记录和分析,观察记录大鼠在5min内的行为举动。主要观察:(1)中央格停留时间:即大鼠被放入开阔箱中央格至其三爪跨离该格的时间;(2)直立次数:两前爪腾空1cm以上或攀附墙壁次数;(3)理毛修饰次数:即前肢向上抬举,抓痒、洗脸,舔足的次数;(4)移动路程:计算5min内大鼠的移动路程;(5)平均速度:计算大鼠在移动过程中的平均速度;(6)粪便粒数:实验结束后,遗留在箱底的粪便数(每只大鼠实验完毕取出后,及时清理其排泄物,将开阔箱打扫干净,以免留有气味而干扰下一只大鼠的实验)。 1.7 统计分析方法 所有计量数据用均数±标准差表示,采用SPSS11.5软件进行统计分析,采用ANOVA进行方差分析,如方差齐性,采用LSD-t检验;如方差不齐,经参数转换后使方差齐性后进行LSD-t检验。 2 结果 2.1 造模时间和自主活动次数的变化 与正常对照组比,模型对照组衰老大鼠的自主活动次数在造