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绿脓杆菌检测方法 一、 基本原理 绿脓杆菌是革兰氏阴性杆菌，具有产生绿色色素和氧化酶等生化实验特征，因此，可利 用选择性培养基培养、菌体检验和生化试验进行鉴定。 二、 主要设备和材料 恒温培养箱、显微镜 三、 培养基和试剂 NAC液体培养基、NAC琼脂平皿、普通营养琼脂平皿、糖发酵培养基、 尿素培养基、西蒙氏柠檬酸盐培养基、硝酸盐培养基、营养明胶、氧化酶试剂。 四、检测程序 NAC固体培养基24h普通营养琼脂平皿V37°C 柱革兰氏染色镜检氧化酶试验革兰染色镜检生化试验半固体动力试验氧化酶试验 NAC固体培养基 24h 普通营养琼脂平皿 V 37°C 柱 革兰氏染色镜检 氧化酶试验 革兰染色镜检 生化试验 半固体动力试验 氧化酶试验 42°C生长试验 报告 五、操作步骤 采样 采取回盲部内容物、粪便或病灶组织、分泌物。 分离培养 将已接种的NAC液体培养基置37°C恒温培养箱中培养24h后观察生长情 况，对未产生绿色色素者转种于NAC琼脂平皿，37C恒温培养24h。 鉴定 3.1生长特性及菌落特征 绿浓杆菌在NAC液体培养基中均匀浑浊生长、有菌膜、大部分菌株可在培 养液上半部形成绿色色素；在NAC琼脂平皿上形成扁平，边缘不齐呈锯齿状， 2?3mm的菌落，大部分菌落可产生绿色色素而致使培养基呈绿色，部分菌株需 延长培养时间方可产生色素。 3.2菌体特征 革兰阴性杆菌，菌体长短不一。 3.3氧化酶试验阳性 被检菌为革兰阴性杆菌，氧化酶阳性及产生绿色色素，可报告检出绿脓杆菌。 3.4生化试验 对不产生绿色色素的菌应做如下鉴定，见表1。 表1绿脓杆菌的主要生化特性 葡萄糖木糖乳糖蔗糖枸橼酸盐尿素 明胶液化靛基质 硫化氢硝酸盐还原产气 + + — — + +/- + — — + +：阳性； 一：阴性；+/-：多数菌株阳性 3.5半固体动力试验阳性 3.6 42C生长试验阳性 结果报告 凡符合上述各项检测结果者做出阳性报告，不符合者做出阴性报告。