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壁虎抗消化道肿瘤的实验研究及机制 壁虎是壁虎科的一种无角壁虎。一些不习惯的行为。它是一种传统的冷和硬中药，也被称为龙木和守宫。它的味道又咸又冷，有小毒。具有驱风、定惊、祛瘀、清热解毒的功效。近年来多种丸、散、膏等剂型已经入药, 广泛应用于临床多种疾病, 对多种恶性肿瘤、结核病、骨髓炎、瘘管、窦道等疑难杂症有确切疗效, 已愈来愈引起医疗界的密切关注。药理学研究发现壁虎具有抗肿瘤作用, 特别是对消化道肿瘤作用显著, 其在治疗消化道肿瘤方面表现出了较深的研究价值。目前, 壁虎抗肿瘤的作用机制尚未完全阐明, 本文将近年来壁虎抗消化道肿瘤的实验研究以及作用机制等进行综述, 为其进一步研究, 开发抗肿瘤新药和指导临床应用提供科学依据。 1 壁虎的抗氧化功能 壁虎主要含有与马蜂毒相似的有毒物质以及组织胺类、蛋白质、氨基酸、维生素和各种微量元素, 但在抗肿瘤有效成分的寻找方面取得成果不多, 目前以壁虎小分子肽类成分研究为主。吴雄志带领的课题组在国内首次从壁虎中成功地分离获得抗肿瘤活性成分--守宫硫酸多糖, 且最新的研究表明守宫多糖是壁虎抗肿瘤与免疫调节的重要物质基础之一。康建功等通过实验发现壁虎脂质体亦有明显的抗肿瘤作用。壁虎含有多种维生素及胡萝卜素, 其中维生素C可提高人体免疫力, 对抗肿瘤大有益处, 而胡萝卜素作为维生素A 的来源也就有抗肿瘤价值, 维生素 A类具有控制靶细胞上皮 DNA 合成和细胞分裂作用, 为其预防癌变的基础。王晓兰等使用醇沉法制备壁虎醇提取物, 实验显示壁虎醇提取物高、中、低剂量组均可抑制S180肉瘤在昆明小鼠体内生长, 在体外能显著抑制食管癌EC9706细胞生长, 且呈剂量和时间依赖性。宋莹等用盐析法及透析法对壁虎醇提物进一步提取分离得到粗多肽, 体外实验采用四噻唑蓝法 (MTT) 检测, 发现壁虎多肽对人食管癌细胞EC109、人肝癌细胞HepG2和人胃癌细胞MGC803增殖均有抑制作用。李钦青等将干壁虎细粉匀浆后使用胃蛋白酶、胰蛋白酶、仿生酶酶解液得到相对分子质量3000的小肽进行抗肿瘤研究, 发现小分子肽对S180肉瘤、肝癌H22的抑制率分别为27.3%、30.1%、32.9% 和26.7%、32.1%、34.0%, 明显高于原粉与水煎煮液。壁虎小分子肽抗肿瘤效果明显, 且毒性低并能够提高机体免疫力, 已成为目前的研究热点, 但是其具体结构的确定有待进一步研究, 随着各种新工艺、新技术、新设备的创新和发现, 将使壁虎的抗肿瘤活性成分更加确切。 2 壁虎醇提物对ec9706细胞凋亡的诱导 (apoptosis, APO) 又称程序性细胞死亡, 是指细胞受到生理或病理信号刺激后通过启动自身内部机制, 而发生的由基因控制的主动性细胞死亡过程, 该过程涉及细胞内外一系列信号传递过程, 细胞发生一系列特征性的形态学和生化改变, 包括细胞核固缩、染色质边集至核膜下以及凋亡小体形成等, 最终死亡。通过APO机体能及时清除受损的或危险的细胞, 介导肿瘤细胞发生自杀式死亡, 而肿瘤细胞可能失去APO能力, 因此恢复该功能可用于肿瘤治疗。现在普遍认为, 无论药物的靶点何在, 多种化疗药物最终主要通过诱导肿瘤细胞凋亡或坏死而达到治疗目的。APO的线粒体通路主要由Bcl-2家族成员调控, 该家族可分为两个亚群:Bcl-2, Bid, Bcl-X, Bcl-W等组成抗凋亡蛋白亚群;Bax, Bak, Bik, Bcl-xs等组成促凋亡蛋白亚群。下调Bcl-2或上调Bax可促进多种因素诱导的多种肿瘤细胞凋亡, 反之则抑制肿瘤细胞凋亡, 因此Bax/Bcl-2蛋白表达比值直接影响着细胞受到刺激后发生凋亡的比率, 两者的平衡是决定细胞死亡和存活的关键因素。 王晓兰等通过MTT法检测壁虎醇提物对人食管鳞癌细胞EC9706的生长抑制作用, 结果发现壁虎醇提物能够明显抑制EC9706细胞株的生长, 且抑制作用呈剂量和时间依赖性;Geimsa染色可见凋亡细胞;免疫组化结果显示, 壁虎醇提物处理细胞24 h后 , 细胞内Bcl-2蛋白无明显变化, 而Bax蛋白表达升高, Bax/Bcl-2比值升高。因此壁虎醇提物可能通过凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值升高而诱导EC9706细胞凋亡。宋佳玉应用MTT法测定壁虎醇提物对食管癌EC-109细胞增值的抑制情况, 体外抑瘤实验显示, 壁虎醇提物组细胞变小变圆, 分泌颗粒增多, 细胞内出现空泡, 并且随着时间和浓度的增大, 大部分细胞脱壁;壁虎醇提物作用于食管癌EC-109细胞48 h后出现明显的细胞凋亡特征 (DNA浓缩致密, 表现为高亮度荧光) ;流式细胞术显示4.0 mg/mL壁虎醇提物作用48 h时细胞凋亡率为19.43%;免疫组化检测显示, 与正常对照组相比壁虎醇提物组Fas蛋白和Caspase-3