肝门部血流阻断对肠黏膜损害所致细菌移位及内毒素的影响.docxVIP

肝门部血流阻断对肠黏膜损害所致细菌移位及内毒素的影响 细菌位移和内毒素血症是肠粘膜屏障损伤的直接结果。本研究以建立机械性阻断肝门血流造成肠道淤血缺血缺氧肠粘膜屏障损害,以观察阻断时间长短与细菌移位和内毒素变化的关系,报告如下。 1 材料和方法 1.1 紫外分光光度计计 (1)CS202B型电热保温干燥箱(重庆试验设备厂紫外分光光度计日本公司 深低温冰箱(北京公司);(4)PCO29OZ二氧化碳培养箱(重庆试验设备厂)。 1.2 动物实验组 1.2.1 动物的诱导麻醉 30只大白兔(成都利华制药厂实验动物室提供)体重2 000～2 500 g/只。术前禁食12 h,肌肉注射氯胺酮30～50 g/kg诱导麻醉,使动物停止燥动,耳缘静脉输液,静脉注射戊巴比妥钠0.03 mg/kg全麻。腹部剪毛、消毒、腹正中切口入腹,分离肝十二指肠韧带,取样后用无损伤血管钳阻断肝十二脂肠韧带血流并计时,分别于15 min,20 min,30 min和60 min时抽门静脉血和切取肠系膜淋巴结标本。 1.2.2 对照组 10只家兔。开腹后不阻断血流,门静脉抽血及肠系膜淋巴结切取时间同实验组。 1.3 测试项目和方法 1.3.1 标准曲线的绘制 采用上海伊华临床医学科技公司(原上海市医学化验所)提供的鲎试剂Ⅱ型、按说明制定标准曲线,即将已知内毒素标准曲线稀释至1.0 EU/ml,0.5 EU/ml,0.125 EU/ml,0.0625 EU/ml,0.03 EU/ml。使用紫外分光光度计测各浓度吸光度,订出标准曲线。-20℃保存的血标本置恒温融化后,取血浆0.1ml,加Tris-HCl 0.2 ml,加灭热源生理盐水0.2 ml混匀,置100℃水浴10 min,离心,取上清0.1ml测定其吸光度,从标准曲线中查出相应的内毒素含量。 1.3.2 细菌位移检测 将肠道内细菌和肠系膜淋巴结在无菌条件下碾碎,置于培养基中,37℃培养箱3 d。光镜下观察细菌生长及类别。 1.4 统计处理 所得资料均采用方差分析。 2 结果 2.1 内毒素测定结果 实验组动物入肝血流阻断后,门静脉血中内毒素含量明显高于对照组(P0.01),且随时间延长,内毒素值升高越明显(表1)。 2.2 细菌培养的结果 实验组动物肝门阻断后肠系膜淋巴结细菌培养阳性数随阻断时间延长而增加,且明显高于对照组(表2)。 3 细菌位移和内毒素式 肠粘膜具有丰富的血供和大约10 m2的面积,有充足的血液循环以保障肠粘膜的血流灌注,维护正常的屏障功能,吸收营养物质,抵御肠道内大量细菌繁殖和毒素产生的侵袭由于肠绒毛的氧交换特点,绒毛顶端的氧张力明显低于动脉,一旦发生感染、创伤、休克等多种疾病时,为保证重要器官的血供,空肠、远端回肠和结肠粘膜和粘膜下层血流减少,肠粘膜组织氧合作用减弱,发生上皮细胞损害,肠粘膜屏障功能减低。本实验研究表明,肝门阻断血流15 min后,门静脉内毒素值明显高于阻断前和对照组(P0.01),细菌移位也随阻断时间延长而增多,阻断20min时细菌培养阳性10%(3/10),60min时阳性70%(21/30),充分证明肠粘膜血液循环障碍、低灌流量是肠粘膜屏障损害的直接原因。 细菌移位和内毒素血症不仅由于肠粘膜屏障功能损害所致,而且内毒素激活膜上腺苷环酶,损伤溶酶体膜和线粒体膜,加重粘膜上皮细胞膜损害激活血管活性物质影响血管舒缩功能,引起微循环障碍,血压下降,进一步加重肠道血灌流不足,加重肠屏障功能损害,如不即时纠正,内毒素血症与肠粘膜屏障损害形成恶性循环使病情恶化。细菌移位和内毒素血症还可使心、肝、肺、肾等多器官功能发生损害,引起多器官系功能障碍和衰竭。目前的研究证明,肠粘膜屏障损害造成细菌移位和内毒素血症在多器官功能衰竭的发病中起关键作用,深入对保护肠粘膜屏障功能的研究实为重要