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蒙古栎叶片对o 近层氧气（o3）是光化学产生的二次污染物。它是温室气体和光化学烟雾的主要成分。这是一种强氧化剂，对植物有很强的毒性作用。降低叶片的空气延续性、光合能力、植株高度和叶面积，加速植物生长，加速植物衰老，改变碳代谢，导致植物和树木的产量降低，严重威胁全球生态系统安全。目前,就平均状况而言,我国大气中臭氧体积分数约为50×10-9~60×10-9,且东部地区比西部地区高约20×10-9。 过去,沈阳市大气受以煤炭为主的能源结构的影响,呈现出明显的煤烟型污染特征,但近年来,由于工业上大量使用化石燃料,农业上大量使用含氮化肥以及汽车数量的急剧增加,大气中氮氧化物(NOX)和氧有机挥发物(VOCS)含量剧增,在日光照射等条件下,导致近地层大气O3浓度日益升高,人们将面临光化学烟雾的威胁。 开顶式气室(open-top chambers,OTCs)自1973年推出以来就得到广泛应用,20世纪90年代初期传入我国,国内多以研究农作物为主,较少研究城市森林,而城市森林系统又是全球生态系统中重要的组成部分,直接影响着全球生态系统的安全。蒙古栎(Quercus mongolica)是沈阳市城市森林的常用绿化树种,因而,模拟未来O3浓度升高对蒙古栎叶片光合生理的影响,为沈阳市城市森林树种的选育提供了理论依据。 1 材料和方法 1.1 实际o3浓度控制试验 试验区位于中国科学院沈阳树木园(41°46′N,123°26′E),是沈阳市人口密集商业文化中心地带。试验主要设施为结构和性能完全相同的6个开顶箱(直径4m、高3m玻璃室壁的正八边形,气室间距4m)及与其配套的通气、通风设备。主要包括臭氧发生器(GP-5J,国产)、臭氧传感器(S-900,新西兰)、温湿度传感器,以及数据分析与自动控制充气系统。在整个试验期间气室内实际O3浓度控制稳定。整个处理期内管理方法相同,箱内水肥条件适宜,无病虫害及杂草等。 试验设2个处理:O3体积分数[(80±8)×10-9]和对照(自然O3浓度,约45×10-9),每个处理设3次重复。选4年生蒙古栎为试验对象,于2007年4月初将其移栽在开顶箱内,每个气室20株。新移栽的苗木恢复后,6月18日开始每日8:00~17:00不间断通入高浓度O3,10月10日停止供气。每隔30d取样1次。每次取样在上午9:00左右,选取蒙古栎相同叶位全展叶片,保温箱冰浴保存,当天开始实验,同步测定各处理蒙古栎光合作用的相关生理指标。 1.2 叶绿体膜活性染料的制备 净光合速率:利用LI-6400便携式光合作用测定仪测定完成。 光合色素含量:用体积分数为80%的丙酮提取,于646nm和663nm处测定吸光度,根据Lichtenthaler等的修正公式计算叶绿素总量和类胡萝卜素含量。 可溶性糖和淀粉含量:用蒽酮法测定,参照邹琦的实验方法。 相对外渗电导率的测定:外渗电导法测定,参见文献的方法。 希尔反应活力的测定:邻菲罗啉盐酸盐比色法。 Ca2+-ATPase的测定:取已制备好的叶绿体悬浮液0.1m L,加入1m L激活液,摇匀后置于64℃水浴中保温4min。冷却后吸取0.5m L,加入0.5m L反应液,37℃水浴保温10min后进入终止反应阶段。 Mg2+-ATPase的测定:取已制备好的叶绿体悬浮液0.1m L,加入0.8m L激活液。摇匀后光照活化5min,再加入0.1m L ATP摇匀,37℃水浴保温5min后进入终止反应阶段。加入20%的三氯乙酸0.2m L终止反应,然后3 000r/min离心5min。吸取上清液0.5m L,加入硫酸亚铁-钼酸铵2m L、蒸馏水2.5m L。摇匀后放置30min,660nm波长下测定吸光度。 2 结果分析 2.1 处理30d时的最优条件 图1表明,O3浓度升高条件下蒙古栎叶片中净光合速率显著低于对照相应值,且最大降幅高达55.37%,在处理30d时,与对照相比差异达到极显著水平(p0.01),在处理60d和90d时,与对照相比,差异显著(p0.05)。 2.2 影响蒙古鹳叶含有相同的氨基酸含量 2.2.1 o3处理前后的比较 在一个生长季内,蒙古栎叶片叶绿素含量的变化趋势基本呈现先升高后下降的趋势,且在整个处理期间,均为O3处理低于对照处理,其值下降了1.56%~13.61%,见图2。与对照相比,叶绿素在处理30d和60d时均显著低于对照(p0.05),而在处理第90天时,叶绿素含量与对照相比达到差异极显著水平(p0.01)。 2.2.2 先升温后下降的趋势 从图3中可以看出,在整个处理期间,高浓度O3处理下蒙古栎叶片中类胡萝卜素含量的变化趋势与对照相似,并且低于对照,呈现出先升高后下降的趋势,其降低的最大幅度为12.8%。在处理第30天时,高浓度O3处理下的蒙古栎叶片中类胡萝卜素含量