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蒙古栎生长性状与硝酸还原酶和可溶性蛋白的关系 蒙古橡树，又称蒙古橡树和蒙古橡树，是地壳斗科的一种落叶树种。主要分布在东北三省和内蒙古。它是中国东北次叶落林的主要树种和主要材料。蒙古橡树木材坚硬、耐腐、质地优美，是优质经济材料。树枝发热量高，是良好的芯收材料。种子含有富含淀粉的粘液，树皮和外壳桶含有水分，可以提取各种工业材料。叶子可以饲养蚕和动物。锯末的屑状物和锯末可以喂养秦耳。它的根发达，适应性强，抗风。在抗侵蚀、保护倾斜、蓄水和土壤侵蚀方面发挥了良好的作用。蒙古橡树已被用作二级保护树种。蒙古橡树具有较高的繁殖价值，但属于繁殖周期相对缓慢的品种。早期选择生长快、品质好的种子，以便早期选择经济效益。这无疑是一个必须尽快解决的问题。利用亚硝酸盐还原酶和可溶性固形物含量的测定结果可以为早期选择树木提供一定的理论依据。 硝酸还原酶 (Nitrate Reductase ,简称NR)是植物氮素代谢生理的关键酶.它对植物生长发育、产量形成和蛋白质含量都有重要影响.国外在6 0年代就开始了NR的研究,我国从70年代末80年代初也开展了这方面的工作,近些年来,众多国内学者对农作物的NR活性、 性状及测定方法作了许多的研究;在林业上,中国林科院亚林所周国璋等人研究了杉木NR的活性但蒙古栎目前这方面的研究还是空白.目前,对可溶性蛋白的研究在作物上较为深入,但在林木上还不多见. 本文研究了东北三省25个不同的蒙古栎种源在6月及9月份的硝酸还原酶活性和可溶性蛋白含量的比较及其与生长性状之间的关系.这为蒙古栎早期选择的初步依据,进而为蒙古栎的遗传育种、森林营造提供重要参考. 1 材料和方法 1.1 穗条的诱导诱导 试验材料来源于黑龙江省带岭林科所的种源实验林,选取沿着纬度梯度分布的东北三省的25个蒙古栎种群,试验于2004年6月和9月份两次采样.25个种源中,每种源选取20株样木,在树冠中部东、西、南、北四个方向剪取穗条,每次采集500个样品,测硝酸还原酶活性的材料需诱导.将穗条插入50 mmol/L的KNO3溶液中,先暗诱导12 h,再光诱导12 h.测可溶性蛋白的材料迅速放入冰箱中-70 ℃保存待测. 1.2 牛血清蛋白标准曲线的绘制 硝酸还原酶的测定以活体法测定硝酸还原酶活性,硝酸还原酶活性可由植物体内产生的亚硝态氮的量表示. 可溶性蛋白的提取及测定采用Brandford法(1976),参考汪家政编著《蛋白质技术手册》中的方法,并作如下修改.称取牛血清蛋白用上样缓冲液配成2mg/mL标准溶液,取8个4mL塑料离心管,分别加入0 μL、1.5 μL、2.5 μL、4 μL、 6 μL、8 μL、10 μL.加3 mLBrandford工作液,反应5 min后,在595 nm处测吸光度.用蛋白量和吸光度进行线性回归,制作标准曲线. 2 结果与分析 2.1 蒙古栎生长的地理特征 通过对6年生蒙古栎不同种源生长性状的方差分析表明:不同种源之间高生长和径生长的差异均达到极显著水平,F树高=2.150**,F地径=2.988**(**α0.01).图1图2说明,蒙古栎不论是高生长还是径生长均具有明显的地理分化,其中苇河、东方红、集安种源长势最好,敦化、抚顺、穆棱、汪清种源生长较差,其余种源居中. 2.2 不同种源蒙古栎羧酸还原酶活性 硝酸还原酶(NR,nitrate reductase)活性被认为是判断植物生长速度的生化指标;是硝酸盐同化过程中的起始酶,也是限速酶,在氮素代谢作用中处于关键地位.它作用于NO-3使之还原为NO-2:NO-3+NADH+H+→NO-2+NAD+H2O.硝酸还原酶活性(NRA)高低不仅表明了植物体内硝酸盐的吸收、积累水平,也反映着植物对氮素的利用水平,在植物氮代谢的研究中,硝酸还原酶活性是研究重点之一. 从图3中可以看出(方差分析表略),25个种源的蒙古栎硝酸还原酶活性在6月和9月的变化趋势基本一致,大致为:随着植株的生长,叶片的生理功能增加,硝酸还原酶活性也逐渐增大;以后随着叶龄的增大,叶片的生理功能减弱,硝酸还原酶活性也逐渐下降.同时,不同植物硝酸还原酶活性差异较大,6月和9月平均硝酸还原酶活性均较大的是集安种源,每克鲜叶硝酸还原酶平均含量分别为2.480 μg·g-1·h-1和1.525 μg·g-1·h-1,其次是汪清、苇河种源,最低的是长白市种源,平均含量只有0.890 μg·g-1·h-1和0.395 μg·g-1·h-1.表明不同种源硝酸还原酶活性的高低与生理周期及自身代谢活性有关. 6月,叶逐渐发育成熟,叶绿素含量达到最大,此时光照充足,降水充沛,气温升高,在这样的条件下十分有利于光合作用,导致净光合速率较大,硝酸还原酶活性较高.而9月以后由于日照缩短、气温下降,叶绿素逐渐分解,光合能力逐渐降低.硝酸还原酶活性变