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植物源维生素c的测定 1 d型脱氢抗坏血酸 维生素c（vitaminc，vc），l-抗坏血酸。天然存在的抗坏血酸有L型 (L-抗坏血酸) 和D型 (脱氢抗坏血酸) 2种。维生素C脱去2个H后成为氧化型的脱氢抗坏血酸, 当有供氢体存在时, 脱氢抗坏血酸又可变为还原型的L-抗坏血酸, 所以脱氢抗坏血酸仍有维生素C的生理活性。值得注意的是维生素C是指L-抗坏血酸, 而非等同于抗坏血酸, 有些文献及教材中将两者混为一谈。 2 抗氧化酶系统c 所有绿色植物都能合成维生素C, 人类自身不能合成维生素C, 必须通过食物 (主要是新鲜水果和蔬菜) 获取。维生素C在酸性环境中稳定, 遇空气中氧、热、光、碱性物质, 特别是由氧化酶及铜、铁等金属离子存在时, 可促进其氧化破坏。水果蔬菜中的抗坏血酸主要以L-抗坏血酸为主, 氧化酶一般在蔬菜中含量较多, 故蔬菜储存过程中都有不同程度流失。但在某些果实中含有的生物类黄酮, 能保护其稳定性。因此实验取材要用新鲜的植物材料。 3 提取维生素c材料 实验取材时要考虑3个重要因素: (1) 维生素C在植物组织中含量很低, 因此要尽量选择维生素C含量高的材料; (2) 尽量不要选择色素含量高, 维生素C难以提取的材料; (3) 植物组织的幼嫩组织 (如叶片, 叶尖等) 维生素C含量相对较高, 提取起来也比较容易。笔者多年教学经验发现, 新鲜的青椒、松树的松针、鲜枣、猕猴桃等材料较适合实验教学。 4 vc最佳稳定剂的确定 (1) 溶解液。草酸廉价易得, 有与磷酸相近的稳定性, 注意的是草酸不应置于日光下, 以免产生过氧化物, 当有催化剂 (如Cu2+) 存在时, 过氧化物能破坏Vc。而醋酸适于浸提含有Fe2+的样品。偏磷酸是Vc的最佳稳定剂, 且具有沉淀蛋白质的作用, 但其价格较贵, 在室温下放置易转化为正磷酸, 降低对Vc的稳定性。 (2) 组织捣碎。尽量用组织捣碎机 (或匀浆机) 代替人工研磨的操作。 (3) 去杂。除去植物组织中的纤维素、叶绿素及沙土等杂质, 可选择4 000r/min转速下离心5~10min, 操作简单、时间短且效果佳。尽量摒弃原始的纱布过滤法, 操作麻烦且误差大。 5 维生素c的测量 目前维生素C的测定方法很多, 对常见的一些方法做了比较如表1。 6 仪器的操作及操作一般在实验中测定维生素c含量,其符合以下方法 由表1不难看出, 在维生素C测定的常见实验方法中, 适合教学的方法显然是2, 6-二氯靛酚法、碘滴定法和磷钼酸法。3种方法的优点在于: (1) 都能够测维生素C的含量。而其它方法中, 有的只能测总抗坏血酸含量, 有的实验步骤繁琐, 有的用的是非常规实验教学仪器, 均不适合实验教学; (2) 操作性强。锻炼了学生的一些基本的生物化学实验技能如称量、组织捣碎、离心、定容、滴定或者分光计的操作技能; (3) 可行性强。多年的教学结果证明, 学生用滴定法的测定结果比用分光光度法的准确, 原因是初学者在比色法操作时容易产生较大误差。文中对实验中的实验取材和提取液制备等步骤做了改进, 以期提高实验教学效果。