竹茶酒对D-半乳糖衰老模型小鼠抗衰老作用的研究.docx

? ? 竹茶酒对D-半乳糖衰老模型小鼠抗衰老作用的研究 ? ? 李昱鼎 叶小辉 叶乃兴,* 林志达 郑德勇 陈兴煌 (1.福建农林大学 茶叶科技与经济研究所，福建 福州 350002；2.福建农林大学 食品科学学院，福建 福州 350002；3.福建农林大学 园艺学院，福建 福州 350002） 茶类酒是以茶叶为主要原料加工而成的新一代风味型酒，该酒酒度低，色泽鲜明透亮，入口软棉，不刺喉，不上头，同时富含功能成分[1]。竹酒是以竹叶或竹节为原料制成的一种竹香浓郁、纯正，清香甘甜，具有药用保健作用的特色酒[2]。兼具二者优点的竹茶酒具有独特而怡人的风味，而且含有较丰富的茶多酚、黄酮类化合物、氨基酸、茶多糖、蛋白质等功能成分，具有良好的抗氧化抗衰老，降低胆固醇，降低心脑血管疾病的发病率，增强免疫功能等作用。本实验观测了竹茶酒对D-半乳糖所致亚急性衰老模型小鼠肝脏及血清中SOD、GSH-Px活性以及MDA含量等指标的影响，对竹茶酒的抗氧化抗衰老功能特性进行验证。 1 材料与方法 1.1 供试材料 ICR小鼠，由吴氏实验动物中心提供；麻竹，由福建农林大学提供；白茶、绿茶由福建谦谦一叶茶业科技有限公司提供；D-半乳糖、抗坏血酸、考马斯亮蓝G250、冰醋酸、无水乙醇，均由国药集团化学试剂有限公司提供；丙二醛（MDA）测定试剂盒、总超氧化物歧化酶（T-SOD）测试盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）测试盒，均由南京建成生物工程研究所提供。 1.2 主要仪器和设备 1.3 试验方法 1.3.1 竹茶酒的制备 茶叶、竹子、水按照 3：7：100 的比例混合，置于锥形瓶中，沸水浴45min，每隔10min摇一次，过滤后冷却备用。将洗净的糯米加水浸泡120 min，沥干后蒸15～20min，至饭粒内无白芯，松软透明。待蒸好的糯米冷却后，按照酒曲、糯米、竹茶提取液1：50：100的比例混合均匀，加盖后于28℃恒温培养箱中发酵7d。将醪液在85℃下灭菌15min，过滤、冷却后即得到竹茶酒。 1.3.2 动物实验分组和设计 雄性ICR小鼠（清洁级）60只，置于标准鼠饲养笼里，每日光照12h，环境温度25℃，每日添加饲料和水，并更换垫料。 实验开始前，对小鼠进行1周的适应性喂养并观察以确认健康。将适应环境后的小鼠随机分成6组，每组10只，分别为：正常对照组、阳性对照组、衰老模型组、竹茶酒低剂量组、竹茶酒中剂量组、竹茶酒高剂量组。除正常对照组每日腹腔注射0.9%的生理盐水外，其余各组小鼠每日腹腔注射D-半乳糖300mg/(kg·d)，持续6周。正常对照组、衰老模型组每日灌胃0.9%生理盐水8mL/(kg·d)；竹茶酒低剂量组、中剂量组、高剂量组每日分别灌胃 4mL/(kg·d)、8mL/(kg·d)，16mL/(kg·d)竹茶酒；阳性对照组灌胃 10mg/(kg·d)维生素C溶液。连续灌胃6周后，摘眼球取血，将取血后的小鼠处死，解剖并摘取脾脏和肝脏。取出的脾脏和肝脏用0.9%的生理盐水冲洗，洗净表面残留血液，用滤纸吸干后称重。 1.3.3 血清、肝脏匀浆的制备 血清的制备：对小鼠摘眼球取得的血液，在3000r/min下离心15min得血清，4℃保存待用。 肝脏匀浆的制备：将用生理盐水洗净并用滤纸吸干的肝脏剪碎，精确称重，放入玻璃匀浆器中，加入9倍体积的生理盐水进行匀浆。 1.3.4 检测指标 （1）小鼠血清、肝脏组织中丙二醛（MDA）含量、总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性以及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性的测定均按照试剂盒中的说明书进行操作。 （2）肝脏组织中的蛋白质含量根据考马斯亮蓝法进行测定。 （3）脏器指数的计算公式： 1.3.5 统计分析 所测得结果均用平均值±标准差表示。数据均采用SPSSV19.0完成统计处理，组间差异性采用t检验，以P0.05为统计学显著意义。 2 结果与分析 2.1 竹茶酒对小鼠脏器指数的影响 采用竹茶酒灌胃D-半乳糖衰老模型小鼠，6周后测定小鼠脏器指数，结果如表1所示。正常对照组与阳性对照组的肝脏指数存在显著性差异（P0.05），与衰老模型组、竹茶酒高中低剂量组之间无显著差异；阳性对照组与衰老模型组、竹茶酒高中低剂量组之间无显著差异。在脾脏指数中，竹茶酒低剂量组、中剂量组之间存在显著差异，而竹茶酒低剂量组与正常对照组、衰老模型组、阳性对照组、竹茶酒高剂量组之间无显著差异；竹茶酒中剂量组与正常对照组、衰老模型组、阳性对照组、竹茶酒高剂量组之间无显著差异。 表1竹茶酒对小鼠脏器指数的影响 2.2 竹茶酒对小鼠肝脏组织中MDA含量及TSOD、GSH-Px活性的影响 采用竹茶酒灌胃D-半乳糖衰老模型小鼠，6周后测定小鼠肝脏组织中MDA含量及T-SOD、GSH-Px活性，结果如表2所示。与衰老模型组相比，各组均能显著