srepomycesmicroflavus5发酵培养基的优化.docxVIP

srepomycesmicroflavus5发酵培养基的优化 1 材料和方法 1.1 病毒 streptic微藻组2005已从河北省中国科学院微生物研究所分离并保存。 1.2 培养基的制备 1:蛋白胨0.5%,葡萄糖1%,氯化钠0.5%,pH 7.2～7.4。121℃灭菌30 min。 2:蔗糖1.5%,可溶性淀粉5%,豆饼粉1.7%,K2HPO4·3H2O 0.4% ,酵母膏0.3%,(NH4)2SO40.2%,CaCO30.2%,NaCl 0.2%,pH 7.2～7.4。豆饼粉沸水煮1 h后,用8层纱布过滤,蒸馏水洗滤渣2次,弃去滤渣,合并滤液用于培养基配制。121℃灭菌30 min。 3:玉米粉2.0%,可溶性淀粉2.0%,蔗糖2.0%,豆饼粉1.5%,酵母粉0.1%,(NH4)2SO40.25%,MgSO40.0025%,K2HPO40.02%,NaCl 0.5%,CaCO30.5%,pH 7.2～7.4。豆饼粉需沸水煮1 h后,用8层纱布过滤,蒸馏水洗滤渣2次,弃去滤渣,合并滤液用于培养基配制。121℃灭菌30 min。 4:可溶性淀粉4.5%,蔗糖2.5%,豆饼粉3.0%,NaNO30.8%,ZnSO40.01%,KH2PO40.001%,pH 7.0。豆饼粉需沸水煮1 h后,用8层纱布过滤,蒸馏水洗滤渣2次,弃去滤渣,合并滤液用于培养基配制。121℃灭菌30 min。 5:可溶性淀粉2%,KNO30.1%,K2HPO40.05%,MgSO40.05%,FeSO40.001%,NaCl 0.05%,pH 7.2～7.4。121℃灭菌30 min。 1.3 液体种子培养 将用高氏1号培养基培养好的斜面菌种接种一环到装有100 mL高氏1号液体培养基的500 mL三角瓶中,28℃振荡培养24 h,转速210 r/min。种子培养完毕后,将液体种子按7%接种量接种发酵培养基(1000 mL三角瓶装培养基200 mL),28℃振荡培养120 h,转速210 r/min进行发酵培养。8000 r/min离心10 min收集菌体,蒸馏水洗涤3次,105℃烘干至恒重,称量菌体干重。 1.4 菌液用量及培养时间 在大试管内装入等量蛭石,每管加入培养液40 mL。每管加玉米“农大108”种子2粒,按每公顷施用0、1500、3000、4500、6000 mLStreptomyces microflavus005菌液计算每管用量,拌种,每个处理重复4次。定时补充培养液,每天轮换试管位置,相同条件下培养21 d。观察出苗率和出苗时间,测量株高、叶面积、地上部分干重和根重。 1.5 不同施肥方案 试验在河北省微生物研究所院内实验田进行,土质为砂壤土,肥力中上。采用随机区组排列,4次重复,每小区长10 m,宽2 m,面积20 m2。玉米品种为“农大108”。试验设4个处理,处理1为对照,采用常规施肥,每公顷施尿素250 kg;处理2为每公顷菌液1500 mL+常规施肥;处理3为每公顷施菌液3000 mL+常规施肥;处理4为每公顷施菌液6000 mL+常规施肥。尿素基施,菌液稀释后拌种。小区内分4行,每行30穴,每穴播种2～3粒。3叶期进行间苗,去除弱苗、病苗,缺株的要及时补苗,5叶期定苗,每穴留单株。拔节期和大喇叭口期分别追施尿素200 kg/hm2。 2 结果与分析 2.1 培养基成分对菌体产量的影响 分别用5种基础培养基培养Streptomyces microflavus005,发酵结束离心收集菌体并干燥称重。不同培养基得到的生物量干重分别为:1号培养基1.40 g/L;2号培养基15.12 g/L;3号培养基8.71 g/L;4号培养基17.67 g/L;5号培养基1.66 g/L。结果表明4号培养基菌体产量最高,2号培养基次之,1号培养基菌体量最低。比较几种培养基组成证明C、N源较丰富的培养基能获得更多的菌体量。所以以4号培养基为基础设计L9(34)正交试验,考察不同含量的可溶性淀粉、蔗糖、豆饼粉和NaNO3对菌体产量的影响,每个处理设2次重复,试验方案见表1。 对实验结果进行极差分析,试验结果和数理统计结果见表2。由表2可见,极差R蔗糖豆饼粉可溶性淀粉NaNO3。蔗糖含量对菌丝产量影响最大,过高的蔗糖含量并不利于菌体生长。豆饼粉含量对菌丝产量也有较高影响,豆饼粉含量的增加有利于菌体生长。可溶性淀粉含量对菌体产量的影响小于蔗糖和豆饼粉的影响,适当的淀粉含量最有利于菌体生长。NaNO3含量对菌体产量影响较低,为了降低成本可以选择一个较低的含量。适当的C源和N源含量最有利于菌体生长,因此优化后的培养基为:可溶性淀粉4.5%,蔗糖0.5%,豆饼粉4.5%,NaNO30.2%,ZnSO40.01%,KH2PO40.001%。 2.2 苹果果