麸炒枳壳标准汤剂指纹图谱及抗氧化活性研究.docxVIP

? ? 麸炒枳壳标准汤剂指纹图谱及抗氧化活性研究 ? ? 张胜娜，周衡朴，刘英杰，吴素香，林洁，朱志红*（.瑞安市中医院，浙江 瑞安 500；.浙江中医药大学，杭州 400；.温州医科大学附属第三医院，浙江 瑞安 500） 麸炒枳壳为芸香科植物酸橙Citrus aurantiumL.及其栽培变种的干燥未成熟果实枳壳的炮制品，用于理气宽中，行滞消胀等[1-3]。中药饮片标准汤剂能作为一种标准，标化不同的临床用药形式，提高用药的准确性和剂量的一致性[4-7]；中药配方颗粒是传统中药饮片、汤剂的改良产品，是中药现代化的重要成果，中药饮片经提取研究制备成标准汤剂，然后采用不同的方法制成中药配方颗粒，因此对中药饮片的标准汤剂进行质量控制也是有必要的。本研究遵循标准汤剂制备要求，制备麸炒枳壳标准汤剂，采用冷冻干燥技术将其制备成标准汤剂冻干粉，计算出膏率，以柚皮苷和新橙皮苷为指标成分，测定其含量，计算转移率，建立指纹图谱，为建立麸炒枳壳标准汤剂的质量标准提供参考；同时进行体外抗氧化活性研究，为麸炒枳壳标准汤剂的临床应用及麸炒枳壳配方颗粒的质量控制提供参考。 1 材料 1.1 仪器 Waters e2695 高效液相色谱仪（美国Waters科技有限公司）；Free Zone 2.5L冷冻干燥机（美国Labconco公司）；DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器（巩义市予华仪器有限责任公司）；RE-3000旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；Synergy H1酶标仪（美国伯腾公司）。 1.2 试药 柚皮苷（批号：110722-201815，纯度≥98%，中国食品药品检定研究院），新橙皮苷（批号：200155-160801，纯度≥98%，江苏永健医药科技有限公司），维生素C（北京索莱宝科技有限公司，批号，DPPH自由基清除能力试剂盒、羟自由基清除能力试剂盒、总抗氧化能力试剂盒（江苏艾迪生生物科技有限公司，批号：），甲醇、乙腈（色谱级，美国天地有限公司），水为超纯水，其他试剂为分析级。 1.3 药材 麸炒枳壳共15批（FZK1～ FZK15），经瑞安市中医院副主任中药师刘英杰鉴定为芸香科植物酸橙Citrus aurantiumL.及其栽培变种的干燥未成熟果实枳壳的炮制品。经检验均符合《中国药典》2020年版规定，样品来源见表1。 表1 麸炒枳壳饮片的来源Tab 1 Source of Aurantii Fructus Praeparatus 2 方法与结果 2.1 麸炒枳壳标准汤剂冻干粉的制备及出膏率的测定 称取15批麸炒枳壳饮片各100 g，煎煮2次。一煎加入饮片8倍量水，浸泡30 min，武火煮沸，文火保持微沸30 min。二煎加入饮片6倍量水，武火煮沸，文火保持微沸30 min。趁热用3层纱布滤过，合并2次滤液，50℃减压浓缩至100 mL，冷冻干燥，得标准汤剂冻干粉，计算出膏率，结果见表2。 表2 麸炒枳壳标准汤剂测定结果Tab 2 Determination of Aurantii Fructus Praeparatus standard decoction 2.2 柚皮苷、新橙皮苷的测定 2.2.1 液相色谱条件 色谱柱：Agilent SB-C18（4.5 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（20∶80）（用磷酸调节pH值至3）；检测波长：283 nm；流速：1 mL·min－1；进样量：10 μL；温度：30℃。供试品及对照品图谱见图1。 图1 枳壳标准汤剂HPLC图谱Fig 1 HPLC chromatogram of Aurantii Fructus Praeparatus standard decoction 2.2.2 对照品溶液的制备 取柚皮苷、新橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每l mL分别含柚皮苷和新橙皮苷80.19 μg、79.08 μg的溶液，即得。 2.2.3 供试品溶液的制备 取麸炒枳壳冻干粉或药材粉末约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称重，加热回流1.5 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，即得。 2.2.4 线性关系考察 精密称取柚皮苷4.90 mg、新橙皮苷4.80 mg，用甲醇配制成含柚皮苷7.65～980.00 μg·mL－1、新橙皮苷7.50～960.00 μg·mL－1的系列对照品溶液，以峰面积（Y）对质量浓度（X，μg·mL－1）进行线性回归。结果柚皮苷的标准曲线为：Y＝1.22×105X＋6.67×105，r＝0.9994，柚皮苷在7.65～980.00 μg·mL－1与峰面积线性关系良