大肠菌群检验（食品微生物课件）.pptx

情境：微生物检测技术任务：大肠菌群测定知识点：MPN 法测定大肠菌群课程：食品微生物技术 MPN 法测定大肠菌群原理 什么叫大肠菌群大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48h内发酵乳糖并产酸产气。一、大肠菌群 二、MPNMPN食品中大肠菌群数是以每100 mL（g）检样内大肠菌群最近似数（The most probable number，简称MPN）表示。据此含义，所有食品卫生标准中所规定的大肠菌群均应以每mL（g）食品内允许含有大肠菌群的实际数值为报告标准。 三、MPN法测定原理MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后，根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。 大肠菌群测定步骤 1.液体样品稀释以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）或其他无菌容器中充分振摇或置于机械振荡器中振摇，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。一、样品稀释 2.梯度稀释用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取（1:10）样品匀液1 mL，沿管壁缓缓注入9 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管混匀或换用1支1 mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，作成1:100的样品匀液。根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1 mL灭菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。一、样品稀释 每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1mL，则用双料LST肉汤），36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内是否有气泡产生，24h±2h产气者进行复发酵试验（证实试验），如未产气则继续培养至48h±2h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。二、初发酵试验 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。三、复发酵试验（证实试验） 大肠菌群检测报告 大肠菌群最可能数(MPN)的报告按照复发酵试验确证的大肠菌群BGLB阳性管数，检索MPN表，报告每g（mL）样品中大肠菌群的MPN值。大肠菌群检测报告 大肠菌群最可能数（MPN）检索表大肠菌群检测报告 阳性管数MPN95%可信限阳性管数MPN95%可信限0.100.010.001上限下限0.100.010.001上限下限000＜3.0—9.5220214.5420013.00.159.6221288.7940103.00.1511230358.7940116.11.218231298.7940206.21.218231368.7940309.43.638300234.6941003.60.171830138821.3183026417180102113.6383104391801107.41.3203117517200111113.63831212037420120113.64231316040420121154.5423209318420130164.542321150374202009.21.43832221040430201143.642323290901000202204.542330240901000210153.742331460902000211204.54233211001804100212278.794333＞1100420—注1：本表采用3 个稀释度[0.1 g(mL)、0.01 g(mL)和0.001 g(mL)]，每个稀释度接种3 管。注2：表内所列检样量如改用l g （mL）、0.1 g(mL)和0.01 g(mL)时，表内数字应相应降低10 倍；如改用0.01g(mL)、0.001 g(mL)、0.0001 g(mL)时，则表内数字应相应增高10 倍，其余类推。每g（mL）检样中大肠菌群最可能数（MPN）的检索表