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魔芋试管苗快繁成魔芋原种种芋的研究 魔芋是天南星科的一种多年生草本植物。现在，阻碍该行业发展的主要问题是其自然繁殖率很低（年繁殖率为3.4），这导致了严重的停滞生产、品种退化和病虫害顽固等问题。利用组织培养方法培养魔芋试管苗, 成功地找到了解决上述问题的途径, 但选择怎样的培养基使试管苗生长更快、怎样降低培养基成本、魔芋试管苗能否直接快繁成供种用的魔芋原原种等, 已成为理论和实践亟待解决的主要问题。因此, 2002年我们进行了魔芋组织培养最佳培养基配方的筛选、试管苗诱导、试管苗移栽形成魔芋原原种种芋最佳方法的筛选等方面的研究工作, 取得了阶段性成果, 并已开始进入产业化试验阶段。 1 材料和方法 1.1 名黑jm-2品种 魔芋材料为本地主栽的em-1和日本的榛名黑 (jm-2) 两个品系。培养基以MS为基本培养基, 植物生长调节物质有IBA、NAA、6-BA、2, 4-D。 1.2 魔芋愈伤组织诱导成通量 组培试验在中心组培室进行, 时间为2002年6月10日～11月18日, 共160 d。从6月10日开始, 以77个20g左右的魔芋块茎作为繁殖材料, 进行魔芋愈伤组织诱导成试管苗的工作, 共接入指管599支进行培养。并由此进行试管苗快繁魔芋原原种种芋的试验。 1.3 诱导愈伤组织的分离培养 结合相关作物的研究, 在MS培养基的基础上, 进行相应配方的调整, 制定了10个培养基配方, 在光照3 000lx, 温度25～28℃条件下进行组织培养对比试验。操作步骤为:①以切成0.5cm×0.5cm×0.3cm大小的魔芋块为外植体, 经过75%浓度的酒精30s和0.1%的升汞12min两次顺序消毒后, 置于装好培养基的指管中, 盖上封口膜后, 用软皮筋扎紧, 置于培育架上。②在25～27℃的温度条件下, 外植体在指管中经过15～20d的培养, 陆续开始产生愈伤组织, 愈伤组织分为粉红色、淡绿色和黑褐色3种, 其中粉红色的愈伤组织不断地继续产生愈伤组织, 淡绿色和黑褐色的愈伤组织经过一个星期的培养后开始有芽点冒出。③将粉红色愈伤组织作为继续扩繁的基础, 不断地诱导愈伤组织。另外, 对有芽点的愈伤组织块将其转入脱分化培养基中, 使其长出茁壮的试管苗。在39～65 d产生第一批试管苗, 为魔芋试管苗快繁成芋作好准备。 1.4 液体培养法 采取固体基质和液体基质两种形式对比培养。①固体基质是1/2珍珠岩+1/2蛭石, 栽培要点是:在移栽前用消毒水将基质拌匀, 移栽后用MS调整营养液作定根水;将消毒好的试管苗直立栽于固体基质中;此后在一个星期内用叶面喷雾法使幼嫩的试管苗保持一定的渗透压, 促进其成活;成活后根据温度和长势情况隔3～5 d浇一次专用营养液, 至移苗时减半使用。②液体基质则是用不同浓度的营养液和清水混兑进行液体培养, 观察试管苗的成活率和生长状况。栽培要点:试管苗长至封口膜下0.3 cm, 先取下软皮筋, 去掉封口膜;然后用消毒的镊子从试管中取出试管苗;接着用纯净水洗去根系上残留的培养基;然后在84消毒液中浸泡5～8 min;再取4 cm×6 cm支撑材料, 包裹2～3层;最后放置于有黑膜的营养盒中, 置于培养架上进行培养, 并观察成芋情况。 对比试验为:选取4～6 cm高的魔芋试管苗40株, 每20株一组, 培养条件为9株·m-2、23～28℃、光强3 000 lx, 分别在前述两种基质中进行栽培。 1.5 愈伤组织试苗的设置 按照以下标准将试管苗进行分类。 As:有芽点且带有愈伤组织的试管苗 (3 mm) ; At:有芽点不带愈伤组织的试管苗 (3 mm) ; Bs:高3～20 mm且带有愈伤组织试管苗; Bt:高3～20 mm不带有愈伤组织试管苗; Cs:高20～40 mm且带有愈伤组织试管苗; Ct:高20～40 mm不带愈伤组织试管苗; Ds:高40～60 mm带有愈伤组织试管苗; Dt:高40～60 mm不带愈伤组织试管苗; Es:高60～80 mm带有愈伤组织试管苗; Et:高60～80 mm不带愈伤组织试管苗。 把上述试管苗移栽至倒苗的时间设定为x, 把试管苗倒苗后形成的魔芋原原种种芋的平均重量设定为y, 共设置10个试验处理。同时进行观察试验。 2 结果与分析 2.1 试苗移栽时间及成活率 魔芋组织培养10个培养基的选择结果见表1。从表1可见, MS2和MS9两个培养基的综合效果较好, 其愈伤组织形成时间分别为18 d和21 d, 列第1位和第3位;试管苗出苗时间分别为40 d和39 d, 居第2位和第1位;试管苗长根时间66 d和67 d, 排第2位和第3位;试管苗移栽时间为78 d和74 d, 属第3位和第2位。 截止2002年11月18日, 共移栽试管苗390株, 成活率为97%;共移栽有芽点的愈伤组织1