等电点电泳 原理 步骤 详细.pptVIP

上海交通大学医学院 当前第30页\共有43页\编于星期六\18点 （二）支持介质(medium)的选择 作用：防止扩散 抗对流 liquid medium：蔗糖、Ficoll gel medium：agarose、sephadex、PAG 上海交通大学医学院 当前第31页\共有43页\编于星期六\18点 （三）聚焦后的检测方法 各种染色法 扫描与定量 其它检测方法 上海交通大学医学院 当前第32页\共有43页\编于星期六\18点 讲课内容 IEFE定义 1 IEFE的特点 2 IEFE的基本原理 3 IEFE的应用 4 血红蛋白的等电聚焦电泳（实验） 5 上海交通大学医学院 当前第33页\共有43页\编于星期六\18点 四、IEFE的应用Applications of IEF 1.分析分离制备蛋白质、多肽 ①区分人血清蛋白 ②测出异常免疫球蛋白 ③基因分型 ④csf中寡克隆区带的检测 2.测定pI可鉴定蛋白质、多肽 3.双相电泳中，IEF作为第一相 上海交通大学医学院 当前第34页\共有43页\编于星期六\18点 双向电泳（two-dimensional electrophoresis, 2-DE） 上海交通大学医学院 当前第35页\共有43页\编于星期六\18点 考马斯亮蓝 银染 上海交通大学医学院 当前第36页\共有43页\编于星期六\18点 讲课内容 IEFE定义 1 IEFE的特点 2 IEFE的基本原理 3 IEFE的应用 4 血红蛋白的等电聚焦电泳（实验） 5 上海交通大学医学院 当前第37页\共有43页\编于星期六\18点 实验 血红蛋白的等电聚焦电泳 Hb具有四条多肽链（α、β、γ、δ）  上海交通大学医学院 当前第38页\共有43页\编于星期六\18点 上海交通大学医学院 / 讲课内容 IEFE定义 1 IEFE的特点 2 IEFE的基本原理 3 IEFE的应用 4 血红蛋白的等电聚焦电泳（实验） 5 上海交通大学医学院 当前第1页\共有43页\编于星期六\18点 一、IEFE 定义 IEFE一种利用具有pH梯度的支持介质分离等电点（isoelectric point，pI)不同的蛋白质的电泳技术。 Isoelectric focusing (IEF), is a technique for separating different molecules by their electric charge differences. 上海交通大学医学院 当前第2页\共有43页\编于星期六\18点  等电聚焦(Isoelectric focusing ,IEF)就是在电泳介质中放入载体两性电解质(Carrier ampholyte)，当通以直流电时，两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，在此体系中，不同的蛋白质即移动到或聚焦于其相当的等电点位置上，也就是说被聚焦于一个狭的区带中，电泳技术中的等电点聚焦也称为聚焦电泳。 上海交通大学医学院 当前第3页\共有43页\编于星期六\18点 讲课内容 IEFE定义 1 IEFE的特点 2 IEFE的基本原理 3 IEFE的应用 4 血红蛋白的等电聚焦电泳（实验） 5 上海交通大学医学院 当前第4页\共有43页\编于星期六\18点 二、IEFE的特点 （一）优点 High Resolution High Sensitivity Good Reproduction 上海交通大学医学院 当前第5页\共有43页\编于星期六\18点 （二）缺点 1.要求用无盐溶液，而在无盐溶液中蛋白质可能发生沉淀。 2.样品中的成分必须停留在其pI，不适用在pI不溶或发生变性的蛋白质。 上海交通大学医学院 当前第6页\共有43页\编于星期六\18点 分辨率(resolution)较不连续PAGE更高，特别适合于分离分子量(molecuar weight,MW)相同而电荷(electric charge)不同的生物大分子。 Q M = —— 6?r? 上海交通大学医学院 当前第7页\共有43页\编于星期六\18点 讲课内容 IEFE定义 1 IEFE的特点 2 IEFE的基本原理 3 IEFE的应用 4 血红蛋白的等电聚焦电泳（实验）