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春兰与大花菖兰杂交后代的根茎培养 大花慈兰科兰科或慈兰科多年生草本植物。这是兰科一些附生兰科植物的总称。大部分品种都是叶长叶茂中分发的，没有味道。花大而多，花期2-4月。 国兰通常指兰属中的部分地生种, 如春兰C. goeringii, 墨兰C. sinense, 寒兰C. kanran, 春剑C. goeringii var longibracteatu和莲瓣兰C. lianpan等, 花小、 色淡, 但芳香、 叶态优美。 利用兰属小花型地生兰与大花蕙兰杂交选育出的一类兰花品种, 结合了国兰和大花蕙兰的优良性状, 具有较高的观赏价值和市场前景。 目前, 兰科植物的育种仍以常规的育种手段为主, 根据育种目标选择适宜的亲本进行杂交, 然后进行播种, 从杂交后代中选择符合目标性状的植株进行扩繁或继续进行杂交。 国外对兰属附生兰种间杂交的研究已有上百年历史, 培育出了数千个新品种, 但对国兰与附生兰种间杂交的研究甚少, 近年来国内研究也多集中在杂交育种和胚培养方面［2－7］, 增殖分化方面杂交兰仅有原球茎的报道［8－9］, 未见根状茎的报道。 本研究的目的是对春兰与大花蕙兰杂交后代种子萌发所获得的根状茎在不同培养基上的增殖与分化条件进行研究, 筛选出最适培养条件, 为培育具香味、 花大、 株型好, 能在春节前后开花的新品种提供技术基础。 1 材料和方法 1.1 ybridum过渡带种子诱导诱导诱导叶片诱导 供试材料为2010年2月利用春兰‘黄水仙’C. goeringii ‘Huangshuixian’与大花蕙兰2个品种‘梦境’ C. hybridum ‘Wanderland’和 ‘皇后 ’C. hybridum ‘Princess Nobuko’ 进行杂交获杂交种子 (分别标记为A和A2组合) , 当年10月种子成熟后无菌播种, 培养基为1/2MS (Murashige and Skoog) + 30 g·L－1蔗糖+ 5 g·L－1琼脂+ 1 g·L－1活性炭, 诱导形成的原球茎经继代培养4~5次, 从中选取稳定生长且较一致的根状茎。 1.2 生长和分化措施 1.2.1不同基本培养基对根状茎增殖与分化的影响A1和A2根状茎分别接在MS, 1/2MS, Knudson C (KC) , VW (Vacin and Went) 和B5等5种培养基上 (表1) , 培养基中附加有60.0 g·L－1香蕉泥、 1.5 mg·L-16-苄基腺嘌呤 (6-BA) 和0.5 mg·L－1萘乙酸 (NAA) 。 根状茎切成约7 mm, 经称量后接种于培养基中, 每个处理20条, 重复3次。 30 d后统计增殖结果, 60 d后观察生长特征, 统计出苗数。 1.2.2不同生长素和细胞分裂素对根状茎增殖与分化的影响以1/2MS为基本培养基, 生长素选则萘乙酸 (NAA) , 2, 4-二氯苯氧乙酸 (2, 4-D) , 并与1.0 mg·L－16-BA进行组合; 细胞分裂素选择激动素 (KT) 和6-BA, 并与0.2 mg·L－1NAA进行组合, 设置对照组, 质量浓度设置见表2和表3, 将A1根状茎接在培养基上, 20条·处理－1, 重复3次。 30 d后统计增殖结果, 60 d后观察生长特征, 统计出苗数, 计算分化率。 1.2.3不同有机添加物对根状茎增殖与分化的影响以1/2MS为基本培养基, 附加有0.5 mg·L－1NAA, 分别添加椰汁、 香蕉泥和土豆汁作为不同处理, 质量浓度设置见表4。 其中香蕉、 土豆均去皮后用榨汁机榨成匀浆备用。 设置对照组, 将A1根状茎接在培养基上, 20条·处理－1, 重复3次。 40 d后统计增殖结果, 60 d后统计出苗数, 计算分化率。 1.2.4生根壮苗将根状茎诱导出的大于1 cm的不定芽小心地分开, 接到生根培养基中。 1.3 水生动物培养室温度 培养基中添加20.0 g·L－1蔗糖, 6.0 g·L－1琼脂, 1.0 g·L－1活性炭, p H 5.6~5.8, 培养室温度 (25±2 ℃, 光照14 h·d－1, 光照强度2 000 lx。 1.4 出苗数量及分化率 培养一段时间后统计新长出根状茎数, 计算增殖倍数, 增殖倍数=新长出根状茎数/接种根状茎数60 d后统计根状茎的出苗数 (苗以超过1.0 cm以上为标准) , 计算分化率, 分化率=出芽根状茎数/接种根状茎总数×100%。 结果采用SPSS 19.0统计软件分析, 用邓肯氏新复极差测验法 (Duncan) 进行差异显著性分析。 2 结果与分析 2.1 培养基种类对杂交兰根增殖分化的影响 在不同的基本培养基上分别接种A1和A2根状茎, 根状茎在10 d后开始萌动, 15 d左右外植体基部切口处出现许多白色颗粒状愈合组织, 之后这