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电针治疗心肌缺血的机制研究 据报道，大脑可以调节血管功能，调节精细氨酸压力（avp）的合成、释放和压力感受器反射。许多神经过渡可能会通过改变自主神经活动来引起心血管反应。本研究通过观察电针手厥阴心包经络穴“内关”、手少阴心经原穴“神门”、手太阴肺经原穴“太渊”对心肌缺血模型大鼠下丘脑室旁核区单胺类递质含量的影响,探索下丘脑在针刺抗心肌缺血过程中的作用机制及其物质基础,研究经脉脏腑相关与脑联系的中枢调控机制。 1 材料表面 1.1 b美国安立默实验动物 健康SD大鼠(合格证号SCXK(苏(2006-005)))80只,雌雄各半,体质量(200±20)g,由江苏省南京安立默实验动物有限公司提供。同等条件适应性饲养1周。 1.2 elisa试验 大鼠去甲肾上腺素(norepinephrine, NE)酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)试剂盒(RB公司,批号;大鼠多巴胺(dopamine, DA)ELISA试剂盒(RB公司,批号;大鼠5-羟色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)ELISA试剂盒(RB公司,批号;氨基甲酸乙酯(乌来糖)(中国上海曹杨第二中学化工厂,批号 050708);实验用水均为超纯水。 1.3 uv重组人组织 16导生理记录仪:澳大利亚AD公司;PCE-A型程控电针治疗仪:安徽天恒科技实业有限公司;ALLEGRA64R冷冻离心机:美国BECKMAN公司;ELX 800UV酶标仪:美国BIOTEK公司;CM1900型切片机:德国LEICA;针灸针:苏州医疗用品厂。 2 动物穴位复制及模型制备 按照《卫生统计学》随机数字表法从80大鼠中随机选择10只作为正常对照组,其余大鼠进行模型复制。将模型复制成功的大鼠随机分为模型组、电针“神门”组(简称“神门”组)、电针“内关”组(简称“内关”组)、电针“太渊”组(简称“太渊”组),每组10只,剩余模型大鼠同等条件下饲养,以备补充实验。存在心电图异常、实验手术或记录失败、麻醉过量死亡、功能状态不良或术中死亡者未列为实验分析对象。 模型复制前记录正常心电图,心电图异常者剔除不用。参照文献的改良方法复制模型。大鼠乙醚麻醉后固定于手术台上,左胸部备皮,常规无菌操作。沿胸骨左缘剪开皮肤,用止血钳游离大鼠左侧的胸大肌,暴露左侧第2～4肋,以便清晰地观察到心脏暗影,用弯头止血钳沿胸骨左缘第3、第4肋间撑开肋骨,挤出心脏,充分暴露心脏及其表面的血管,用4/0医用缝合线在冠状动脉左前降支下1/3处快速结扎,心脏复位后立刻关闭胸腔。根据模型复制前后心电图变化情况及血清酶学指标肌酸激酶(creatine kinase,CK)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性的改变评判心肌缺血模型复制成功与否。 分别无菌操作各电针组大鼠左侧“内关”、“神门”和“太渊”穴区,用不锈钢28号0.5寸毫针直刺入穴位,针柄连接PCE-A型程控电针治疗仪输出端,参考电极置于穴区沿经脉纵向近端约2 mm处,接电针仪的另一输出端。电针刺激,刺激电压5 V,电流强度1.1 mA,频率为2 Hz,波宽300 ms,正负向交替方波刺激,每次刺激10 min。模型复制后第3天开始电针治疗,每天1次,电针3 d。穴位定位参照林文注《实验针灸学》。模型组大鼠只固定不电针。 针刺治疗结束后在大鼠麻醉状态下活体取材,距第一次针刺时间50 h左右。30 mg/L水合氯醛腹腔麻醉,活体开颅取出完整脑组织,参照Paxinos和Watson大鼠脑解剖图谱,在冰盘上用无菌刀片切取下丘脑室旁核区2 mm×2 mm×2 mm脑组织,称质量后立即标记置于3 ml冻存管,液氮冷藏保存,每只动物取材时间不超过2 min。对照组取材时间、范围和方法与针刺组相同。标本检测严格按照ELISA实验操作说明进行。 连续型变量均用“ˉx±sxˉ±s”表示,使用SPSS 17.0 for Windows统计软件进行数据分析。多组间均数比较采用单因素方差分析,组间均数两两比较采用LSD法。其中,P0.05为差异具有显著性,P0.01为差异具有非常显著性。 3 结果 3.1 模型中的大鼠血清活性改变 与正常对照组比较,模型大鼠血清CK和LDH水平显著升高(P0.05)。见表1。 3.2 组内关、神门3-ht含量的比较 与正常对照组比较,模型组大鼠下丘脑室旁核区NE、DA、5-HT含量显著下降(P0.01)。与模型组比较,“内关”组、“神门”组NE、DA、5-HT含量均显著升高(P0.01);“太渊”组仅NE含量显著升高(P0.05)。 4 心肌缺血损伤枢纽调控物质 中枢单胺类递质与心血管活动有着极为密切的