神经激肽b受体在小鼠中枢神经系统内的定位分布.docxVIP

神经激肽b受体在小鼠中枢神经系统内的定位分布 tachykoinf-主要由p物质（sp）、神经a（k物质）和神经激励b（nk）组成。它们在神经系统和身体的生理活动中发挥着重要作用。其作用是通过各自的受体完成的,它们分别是SP受体(NK1)、神经激肽A受体(NK2)和NKB受体(NK3),现已阐明了3种受体的氨基酸序列。由于SP/NK1在外周伤害性信息向中枢传递中起重要作用,因而大量研究人员从事其形态和功能的研究,而对速激肽家族的其他2个成员研究较少。我们曾在细胞水平上详细研究了NK3受体在大鼠中枢和胃肠道内的分布,在此基础上,本研究采用免疫组织化学技术对NK3受体在小鼠中枢神经系统内的分布进行了详细观察。以为进一步研究NK3受体的功能提供形态学资料。 体免疫组织化学染色 雄性昆明小鼠5只,体重25~30g。用戊巴比妥钠(100mg/kg)经腹腔麻醉后,开胸经左心室先以20ml生理盐水冲洗血液,再用100ml含4%多聚甲醛的0.1mol/L的磷酸缓冲液(PB,pH 7.2)灌注固定30min。灌毕立即取出脑和脊髓,并在30%蔗糖的PB内过夜(4℃)。冰冻切片(厚40μm),切片收集于PBS内。NK3受体免疫组织化学染色步骤如下:(1)在兔抗NK3受体多克隆抗体(1∶50)内室温下孵育过夜;(2)生物素标记的羊抗兔IgG(Vector,1∶200)室温下孵育4h;(3)ABC复合物(Vector,1∶200)内反应2h。其中一抗和二抗用含1%驴血清和0.3%的Triton X-100的0.01mol/L的磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.2)稀释,ABC复合物用含0.3%的Triton X-100的PBS稀释。最后切片在含0.05%的DAB和0.003%的H2O2的0.05%mol/L Tris-HCl缓冲液(pH 7.6)内呈色20~30min。切片裱于涂有明胶的载片上、经脱水透明、DPX封片。部分免疫组织化学染色的切片经克紫复染,用以准确定位免疫反应产物在各脑区的分布。核团的命名采用Franklin和Paxions合著的小鼠脑图谱。显微镜下观察结果按以下标准描述阳性密度:10倍物镜下将阳性产物的强度相对地分为浓(+++.阳性胞体3~5个/mm2以上)、中等(++.阳性胞体1~3个/mm2)和淡(+.阳性胞体0~1个/mm2)3个等级。 对照实验用正常兔血清代替一抗或省略一抗,结果为阴性。 神经毡内脑区的界定 免疫组织化学染色结果表明,NK3受体样免疫反应产物广泛分布于小鼠脑和脊髓内。在大部分脑区其定位于胞体和树突上,在少数脑区位于神经毡内。本文按以下标准描述阳性密度:将阳性产物的强度分为浓(+++,如斜角带)、中等(++,如苍白球)和淡(+,如中脑导水管周围灰质)3个等级,并将NK3受体样免疫反应产物的分布归纳成附表。 1. k3受体样免疫反应 嗅球和有关结构:在主嗅球内,NKR-LI主要分布在小球层和僧帽细胞层,少量僧帽细胞为NK3受体样免疫反应(图1)。外形层的内侧部含有来自僧帽细胞的阳性树突,而内多形层和颗粒层为阴性。在副嗅球内,外多形层内含有致密的免疫反应产物,僧帽细胞层着色浅淡。前嗅核和嗅结节内分布少量NK3受体阳性神经元,而Calleja细胞岛、外侧嗅束核、副嗅束基底核为阴性。 2. 神经毡内质结构 在大脑新皮质的各层内散在分布一定数量的NK3受体阳性神经元,浅层(Ⅰ~Ⅲ)多于深层(图2)。此外,Ⅴ层神经毡内含有浅淡的反应产物。其他皮质结构(扣带回皮质、压部后皮质、嗅周皮质、内嗅皮质、旁下托和前下托)内也分布深浅不一的NK3受体样免疫反应产物,但梨状皮质为阴性。海马和齿状回的各层内散布少量NK3受体样阳性神经元。 3. oca斜角带核 大量浓染的NK3受体阳性神经元分布于内侧隔核、Broca斜角带核(图3)和无名质,这些神经元的胞体和树突均有免疫反应,酷似Golgi染色外观(图4)。外侧隔核和隔伞核内分布个别的NK3受体阳性神经元。 4. 尾壳核的阳性细胞 苍白球内分布较多NK3受体阳性神经元,其染色较深(图5)。在尾壳核内,阳性神经元主要出现于其前2/3部分,后1/3细胞稀少。在尾壳核的最前端,NK3受体阳性细胞多位于核的中央部,而在其后的平面上,阳性细胞多靠近胼胝体(图7)。此外,伏隔核、腹侧苍白球、无名质内也有数量不等的阳性神经元,但屏状核、脚内核和底丘脑核为阴性。 5. 神经元胞体 在杏仁核内,强阳性和中等强度染色的NK3受体阳性的神经元胞体主要位于杏仁内侧核、基底内侧杏仁核和前皮质杏仁核内(图6)。杏仁外侧核、基底外侧杏仁核内未见NK3受体阳性神经元。 6. nk3受体基因型神经元自由基因子 在视前区,淡染的NK3受体阳性神经元见于外侧区,内侧区仅分布个别散在的阳性细胞(图7,8)。以下丘脑结节区内数量最