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自发性高血压大鼠下丘脑视上核和室旁核-anducin表达的增龄变化 0 hs-4期糖代谢及信号转导系统 高血压是遗传和环境相互作用的疾病。作为钙调节蛋白的结合蛋白质，它参与了膜层结构的维持和膜间离子的流动，尤其是na-膜的流动。盐与高血压的关系一直是人们关注的焦点。由于膜层结构和功能变化引起的离子移植缺陷和信号转导异常，许多研究表明，可能是高血压（尤其是高血压）的发病机制之一。通过盐敏感性和高血压，aduin可以将环境（盐）与遗传因素（pdn）之间的桥梁联系起来。研究表明，中枢神经系统尤其是儿童区块的视上核和视侧核（son）在调节高血压方面发挥着重要作用。使用免疫组化技术，以不同年龄的自发高血压大鼠（shr）作为动物模型，观察下颌son和pvn中不同年龄的糖转移以及高盐摄入的影响。 1 材料和方法 1.1 实验饲料与试剂 5, 25, 49 wk龄雄性SHR(第四军医大学实验动物中心提供)各20只,各年龄段随机分为高、正常盐两个亚组,每组10只. 实验期间自由饮水,饲料为西安交通大学医学院动物实验中心提供的混合饲料,高盐组饲料含40 g/L普通加碘盐,正常盐组饲料含9 g/L普通加碘盐, 喂养3 wk. 饲养条件温度18～25℃,相对湿度45%～65%. 兔抗鼠γ-adducin抗体(SC-25733)由美国Santa Cruz Biotechnology公司提供,生物素标记的羊抗兔抗体由武汉博士德生物工程有限公司提供. 1.2 免疫组化染色sabc 各年龄组SHR预适应1 wk后应用鼠尾血压计检测尾动脉收缩压(SBP). 正常或高盐饮食喂养3 wk后, 复测血压比较各年龄组SHR正常盐和高盐喂养后SBP的变化. 各年龄组SHR处死大脑灌注取材,根据大鼠大脑立体定位图谱自前囟后0.8, 2.3 mm脑组织连续冠状切片,结合Nissle染色定位下丘脑SON和PVN. 应用免疫组化染色(SABC法)检测γ-adducin在SHR下丘脑SON和PVN中的增龄性表达及盐摄入对其表达的影响. 利用图像分析系统对免疫组化染色强度进行定量分析. 高倍镜下,选3个视野,测定每个视野的阳性物质的灰度值. 统计学处理: 所有数据采用SPSS 11.5软件进行统计分析. 计量资料以ˉx±sxˉ±s表示, 采用方差分析及LSD-t检验. P0.05认为差异具有统计学意义. 2 结果 2.1 幼小盐负荷后盐负荷对盐放养的影响 在成年组和老年组盐负荷后收缩压水平较正常盐喂养的均显著性升高(P0.01),但在幼年组,盐负荷后较正常盐喂养的收缩压水平无统计学差异(P0.05, 表1). 2.2 -aducin的表达 SHR下丘脑SON中γ-adducin的灰度值随年龄增长呈递增趋势,即其蛋白表达呈递减趋势. 在正常盐喂养情况下,γ-adducin的表达在老年组与幼年组、老年组与成年组均有统计学差异(P0.05), 而成年组与幼年组间比较无统计学差异(P0.05). 在高盐干预后,γ-adducin的表达在老年组与幼年组之间比较亦有统计学差异(P0.05),而老年组与成年组间、成年组与幼年组比较无统计学差异(P0.05). SHR下丘脑PVN中γ-adducin的灰度值随年龄增长呈递增趋势,即其蛋白表达呈递减趋势. 无论正常盐喂养,还是盐负荷后,老年组与幼年组、老年组与成年组之间均有统计学差异(P0.05),而成年组与幼年组之间比较无统计学意义(P0.05, 表2). 各年龄组内高盐亚组与正常盐亚组间比较,下丘脑SON和PVN中γ-adducin的表达均无统计学差异(P0.05, 表2). SHR下丘脑中SON和PVN的γ-adducin表达均随年龄的增长而逐渐减少,而盐负荷对其无明显影响(图1). 3 年龄与盐胁迫对大鼠膜骨架蛋白和肝肾功能相关基因表达的影响 本研究我们观察到雄性SHR下丘脑SON中γ-adducin表达存在增龄性改变,表现为随着周龄的增加其表达逐渐降低,盐负荷对这种改变无明显影响. 结果提示γ-adducin增龄性表达减少可能是SHR血压随周龄增加而升高的因素之一. 流行病学研究和临床观察显示,不仅高血压的发病率随年龄的增加而增加,而且血压对钠盐的反应亦呈明显的年龄相关性. 我们的追踪研究结果显示, 随着年龄的增加, 盐负荷后的血压增高幅度逐渐增大,盐敏感者的检出率明显增加. Bianchi等发现,米兰高血压大鼠(MHS)的膜骨架蛋白adducin基因存在点突变(A亚单位基因:F316Y,B亚单位基因:Q529R),将这种突变基因转染给正常米兰高血压大鼠(MNS),其肾小管上皮细胞钠泵表达活性显著增加(296%); Cusi在意大利和法国两个不同的人群中发现,а-adducin基因多态性与高血压有明显的相关并参与钠代谢的调节,但我们对中国