2024年高考生物大一轮选择性必修3复习课件：热点微练10 PCR技术与电泳相关问题.pptxVIP

热点微练10 PCR技术与电泳相关 问题SHENG WU XUE(时间：30分钟)一、选择题1.(2023·山东聊城期末)实时荧光RT--PCR可用于RNA病毒的核酸检测，其原理是：在PCR复性过程中探针和引物一起与模板结合，探针两侧分别带有荧光基团和抑制荧光发出的淬灭基团，新链延伸过程中，DNA聚合酶会破坏探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。利用RT—PCR进行核酸检测的相关过程如图所示。下列说法错误的是(　)CA.做RT--PCR之前，需要先根据cDNA的核苷酸序列合成引物和探针B.RNA不能作为PCR扩增的模板，故需要将样本中的RNA逆转录为DNA后再进行扩增C.若检测结果有强烈荧光信号发出，说明被检测者没有感染病毒D.病毒的检测还可以检测病毒表面的物质或病毒引发产生的抗体，其原理都是抗原—抗体杂交解析　PCR扩增必须以DNA为模板，RNA不能作为PCR扩增的模板，所以需要将样本中的RNA逆转录为cDNA后再进行扩增，B正确；若检测结果有强烈荧光信号发出，说明被检测者极有可能感染了病毒，C错误。二、非选择题2.(2023·重庆市质检)PCR是以模拟体内DNA复制的方式在体外选择性地将DNA某个特殊区域进行扩增的技术。DNA扩增过程的产物有长产物片段和短产物片段两种，其形成过程如图1所示。请回答下列问题：图1(1)DNA复制时子链延伸的方向是________(填“5′→3′”或“3′→5′”)。由于DNA聚合酶不能直接催化两个单核苷酸之间的反应，因此DNA复制需要一段单链DNA或RNA作为________。(2)如果扩增序列为图2所示的两段序列之间的DNA片段，请从表中列出的引物中选出一对合适的引物________。5′→GACCTGTGGAAGC……CATACGGGATTG-3′3′-CTGGACACCTTCG……GTATGCCCTAAC-5′5′→3′引物甲和D图2(3)下面为某同学利用PCR仪进行PCR的操作步骤，请完善相关步骤内容。a.按配方准备好各组分。b.用微量移液器向微量离心管中依次加入各组分：模板DNA，4种脱氧核糖核苷三磷酸、____________________、引物、缓冲液等。耐高温的DNA聚合酶离心c.________使反应液聚集在微量离心管底部。 d.将微量离心管放入PCR仪，设定好PCR仪的循环程序。 e.进行PCR反应。 (4)PCR的产物片段中，只有________________才是符合要求的目标产物。双链短产物片段解析　(1)DNA复制时子链延伸的方向是5′→3′。由于DNA聚合酶不能直接催化两个单核苷酸之间的反应，因此DNA复制需要一段单链DNA或RNA作为引物，当引物与模板链结合后，单个的脱氧核苷酸才能结合上来。(2)引物与DNA的模板链的3′端能够配对，如果扩增序列为图2所示的两段序列之间的DNA片段，则根据碱基互补配对原则，最合适的引物为甲和D。(3)PCR是在体外进行DNA复制的技术。该过程需要模板、原料、引物、耐高温的DNA聚合酶等。离心使反应液聚集在微量离心管底部。(4)DNA是双链，PCR的产物片段中，只有双链短产物片段才是符合要求的目标产物。3.(2023·江西赣州市模拟)新冠病毒的遗传物质是单链RNA，其主要的抗原是S蛋白，可利用荧光PCR技术快速检测核酸。被检测者咽拭子取样后，用提取的总RNA合成相应的cDNA，再用PCR技术进行扩增。若样本扩增出了新冠病毒特定的核酸序列，则检测结果为阳性，检测过程如图所示。回答下列问题：(1)为扩增出S蛋白基因(核酸序列)，过程①应以_________________________作为模板来合成相应的cDNA。过程②是通过PCR技术进行扩增，依据的生物学原理是___________。(2)过程②的反应体系中加入了两种引物，这两种引物需要具备_____________________________________________________________________(答出两点)等条件；加入的耐高温的DNA聚合酶最显著的特点是________；还需要加入dATP(脱氧三磷酸腺苷)、dTTP(脱氧三磷酸胸苷)、dCTP(脱氧三磷酸胞苷)和dGTP(脱氧三磷酸鸟苷)，这四种物质的结构与ATP的相同，加入的这四种物质的作用是_____________________________。待测样本中提取的总RNADNA复制引物自身及引物之间不应存在互补序列，引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰耐高温提供反应所需的原料和能量(3)PCR反应体系中含有荧光物质，扩增出的S蛋白基因的单链会发出荧光信号。临床上以检测到荧光信号来确定检测结果为阳性，理由是____________________________________