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小麦染色体c-分带技术的研究进展 1 异染色质的浓缩程度 染色带是一种用特定的染色过程中对染色带的染色，具有不同的深度。生物细胞中有常染色质和异染色质之分,在细胞分裂过程中,异染色质的浓缩程度要比常染色质的浓缩程度高。在染色体分带中,经酸、碱、酶或高温的处理后,DNA变性双链打开,由于异染色质区的复性速度快,易于染料结合染色较深,而常染色质复性慢,结构松散染色较浅,从而在染色体上出现深浅不一的带纹。特定染色体有特定的带纹,因此分带技术可作为鉴别染色体组和单个染色体的手段,从而可以深入认识染色体结构成分和遗传的关系。 1.1 小麦染色体中c-分带 染色体分带技术中最初的显带是荧光显带,上世纪60年代末发明了Q显带技术,它是将植物染色体经芥子奎吖因(quinacrine mustard)处理后,在荧光显微镜下形成明暗不同的带纹。1973年发明了另一种荧光显带技术,Hoechst33258显带,其原理主要是基于染料分子与 DNA分子中的碱基作用,从而显带。1970年,Fardue和Gall在研究中发现染色体着丝粒区可特殊显带,1971年Arrighi等在此基础上建立了Giemsa C-分带技术。Giemsa显带最早是在1970年应用在哺乳动物染色体上,1972年以后应用在植物方面。1974年Gill和Kimber最先报导了黑麦染色体上的C-分带技术。随着制片技术的发展,分带技术也在不断改进和完善,C-分带技术已应用于很多植物,尤其是麦属植物中研究较为深入。研究表明,小麦染色体C-分带带型比较稳定,并且重复性好。杨瑞武等利用改良的C-分带技术分析了矮杆波兰小麦的染色体带型,发现在非同源染色体之间,带型的数量、大小、强弱及其分布情况存在明显差异。荧光显带也应用到很多植物中,并且其操作简单,与其它的分带技术存在异同。Liu等发展的DAPI荧光显带技术在染色体未经化学处理的情况下,直接用DAPI进行染色,在植物染色体上显示出类似与Q-带的丰富带纹,且带纹稳定,无论是大基因组还是小基因组都能够很好地显示出带纹。陈建民等对苜蓿染色体荧光分带时发现DAPI带型的数目和位置与C-带基本相似,两个二倍体的DAPI带型明显不同。 1.2 荧光显带是检测dna结合能力的依据 植物染色体Giemsa C-分带是染色体经过一定的酸、碱、酶或高温处理后用Gimesa染料染色,使染色体在特定位置上出现深浅不一的带纹,它是对染色体的结构异染色质区域染色。C-分带是植物染色体研究中应用最为广泛的一种分带方法,主要用于染色体的鉴别和核型分析,同时为物种亲缘关系的鉴定提供依据。 荧光显带是是根据荧光染料与DNA中AT、CG碱基结合能力的不同而在染色体上显示出带纹。如DAPI(4,6-diamidino-2-phenylindole,即4,6-二-2-苯基吲哚)、DA远霉素(Distamycin A)等与AT碱基特异结合,CMA色霉素(Chromomycin A3)、AMD即放线菌素D(Actinomycin D)等特异性与CG碱基结合,利用这种特异性的结合使染色体上不同部位出现荧光带纹。荧光显带反映了染色体中DNA碱基组成的不同和变化。但有学者研究表明在局部环境下蛋白质可能会影响染料与DNA的结合能力,同时也可能对荧光的激发和散射产生影响。 Giemsa C-分带技术在开创以来最先是在动物细胞学研究方面应用的比较多,随着技术的不断改进和完善,如今已经被广泛应用到植物研究中,而且被应用到的植物种类越来越多,技术和方法也越来越成熟,它在植物研究领域的应用主要有以下几个方面。 1.2.1 小麦染色体核型 以往进行的核型分析只能根据染色体的形态特征(长度、臂比、缢痕、随体等)进行区分,这种常规的分析方法有其自身的局限性,不能将物种的染色体一一区分开来。应用分带技术进行植物染色体核型分析可以克服这些缺点,能够更加准确区分染色体,准确分析核型,从而为深入研究物种起源和遗传关系等提供重要的细胞学资料。以研究最多的麦属为例,普通小麦的染色体大小和臂比相近,常规方法难以区分,Gill等最早对小麦进行了C-分带,对其染色体进行了区分。Endo等又用改进的分带方法对普通小麦分析,结果除了1A外的所有染色体都显示出特异带纹,使得各个染色体都能清楚辨认。目前对于研究最多的黑麦来讲,其染色体C带核型特征已经被确定。吴金华等对奥地利黑麦进行C-分带染色体核型分析发现,除了2R和4R长臂近端部约1/4处有带且7R无中间带外,其余带型与黑麦标准C-分带带型基本一致。刘光欣等对8个大赖草材料进行了C-分带研究,结果发现大部分染色体都显示较强的末端带,着丝粒带和中间带则不丰富。 1.2.2 小麦染色体易位鉴定 由于不同物种的染色体显带不同,因此已将C-分带技术应用于植物远缘杂交和染色体工程研究细胞学鉴定中