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毒理学实验鱼品种和控制条件 随着人类生产活动的发展，各种有害药物和因素不断进入环境，污染环境，对身体构成潜在威胁和损害。环境保护已成为人类密切关注的重大问题。 环境毒理学是利用毒理学的方法, 研究环境污染物对人体健康的影响以及致毒机理的学科, 是环境医学的一个组成部分, 也是毒理学的一个分支学科。通过研究环境污染物及其在环境中的降解和转化产物在动植物体内的吸收、分布、排泄等生物转运过程, 阐明环境污染物对人体毒副作用的发生、发展和消除的各种条件和机理。研究环境污染物对人体的作用, 除了直接通过流行病学和临床观察外, 主要借助于动物实验, 以阐明毒物的毒性、毒理作用、剂量等反应关系, 确定阈剂量及最大无作用剂量, 为制定卫生标准提供初步依据。 用鱼类作实验动物是从20世纪60年代末至70年代初G.Streisinger建立斑马鱼 (Brachydanio rerio) 纯系开始的, 到目前已培育出近交20代的纯系鱼类。无菌鱼类实验动物也在研究探索之中。选用鱼类进行试验研究, 特别是进行毒理学试验, 具有很多独特的优点。鱼类繁殖力强, 世代周期短, 如剑尾鱼 (Xiphophorus helleri) 7 个月可达性成熟, 稀有鮈鲫 (Gobiocypris rarus) 4个月可达性成熟。鱼类的遗传容易控制, 一次产卵量大, 如红鲫 (Carassius auratus) 的怀卵量多达8万粒, 且1年多次自然产卵。鱼类繁殖为体外受精、体外发育, 卵径大, 对胚胎易于进行观察分析, 有利于人工繁殖、基因纯化和转基因鱼的培育。鱼类对水质的变化十分敏感, 只要水体中含有极微量的有毒有害物质就会引起很强的反应;除以死亡为指标外, 对其生活习性的影响更为灵敏;实验结果判断明确并易于掌握等。在毒理学研究中鱼类有着独特的用途, 是急性毒性试验、蓄积毒性试验、亚慢性和慢性毒性试验、致突变、致畸、致癌试验的首选实验动物。 1 实验动物及加强对斑马鱼的应用 鱼类对有毒有害物质十分敏感, 因此试验必须选择合格和具有代表性的鱼类。经济合作与发展组织 (OECD) 、国际标准化组织 (ISO) 、美国环境保护署 (USEPA) 等组织机构推荐的实验鱼有斑马鱼、黑头软口鲦 (Pimephales promelas) 、日本青鳉 (Oryzias latipes) 、孔雀鱼 (Poecilia reticulata) 等小型鱼类, 应用于毒理学研究。随着实验动物科学的发展, 有关鱼类实验动物的研究日渐活跃。毒性试验选择的实验鱼除了要求容易获得、实验室易饲养且对毒物较为敏感外, 更趋向于性成熟时间和世代周期较短、饲养成本低的小型鱼类。近年来, 我国对稀有鮈鲫、剑尾鱼、红鲫等实验鱼进行了纯系培育, 并在毒理学、药理学及环境监测方面开展了深入的研究和应用。在毒性监测方面, 斑马鱼的应用也越来越广。 试验用鱼应选择行动活跃, 体色光泽, 鱼鳍完整舒展, 逆水性强、食欲好, 规格整齐 (全长5 cm左右) , 无任何病症的健康个体。同一批试验用鱼应在同一条件下获得, 试验前暂养一周以上, 此间每日投饲1次, 进入试验前48 h停止投饲, 试验中使用的饵料生物必须符合试验要求并严格控制。试验前4 d内, 暂养鱼的死亡率及发病率必须在10 %以下。试验容器的盛水量以2～3 L/尾为宜, 同一剂量组的每个试验浓度, 实验鱼的数量不得少于10尾, 水温保持在一定的范围, 温水性鱼类为 (20～28) ±2 ℃, 冷水性鱼类 (12～18) ±4 ℃, pH值6.7～8.5, 水体溶氧量4 mg/L。试验必须设置仅以水饲养的对照组。若对照组中10 %以上的鱼死亡时, 该次试验结果无效。平行试验组必须在同一类容器内进行。 2 急性阈剂量试验 急性毒性试验 (acute toxicity test) 是对实验鱼一次或24 h内多次染毒的试验, 探明环境污染物与机体短时间接触后所引起的损害作用, 找出污染物的作用途径、剂量与效应的关系。主要是测定半致死量 (median lethal dose, LD50) 、急性阈剂量 (浓度) [acute threshold dose (concentration) ], 观察急性中毒表现、经皮肤吸收能力, 以及对皮肤、粘膜、鳃和眼有无局部刺激作用等, 以提供受试毒物的急性毒性资料, 确定毒副作用方式和中毒反应, 为亚慢性和慢性毒性试验的观察指标及剂量分组提供参考。鱼类LD50以周围水环境中存在的有害物质的浓度表示, 即在特定时间内, 相当于50 %死亡率的浓度称为半数致死浓度 (median lethal concentration, LD50) 。通常计算24、48、96 h实验鱼类的LD50, 根据试验需要, 也可将测定的时间缩短或延长