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改良大鼠心肌缺血再灌注模型的构建 由于老鼠动脉的形状和血液循环接近人类，冠状动脉侧支循环较少，心肌坏死的发生速度快，稳定性好，成本低。广泛用于对该病发生发展机制进行研究和对可行性干预措施的研究。但纵观近年各研究结果，均集中在对具体操作某一环节进行改进，且模型制作过程中随意性大，存活率不稳定。术后模型成功的评价也主要应用病理学方法进行检测，这与临床上对患者进行心电监测、心肌酶谱分析、心功能检测的实际应用不相符合。本实验综合各模型制作的优势，注重细节的操作，就实用性、稳定性等进行了改进。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 syxk新2002-4001 健康成年雄性SD大鼠32只，体重220～260 g[新疆医科大学实验动物中心提供，SYXK(新)2003-0001]，随机分为四组。A组:伪手术组(只穿线，不结扎)，B组:心肌缺血组(72 h)，C组:心肌缺血再灌注组1(心肌缺血30 min后再灌注)，D组:心肌缺血再灌注组2(心肌缺血60 min后再灌注)。 1.1.2 手术治疗前评估t5 小动物呼吸机(成都泰盟，HX-200)、心电图机(上海光电，ECG8951D)，心电监护仪(迈瑞，Beneview T5)、显微镜(Carl ZEISS)、自制小拉钩(曲别针弯曲而成)、气管插管(16号套管针套)、动脉插管延伸管(移液器枪头拉制成长约10 cm，直径约1.5 mm)、小塑胶管(24号套管针套，长约5 mm)、手术台(长约50 cm，宽约40cm泡沫板而制)、各种手术器械(显微镊、显微针持、眼科剪等)、缝合针、可吸收肠线等(图1，见彩插2)。 1.1.3 主要药物和试剂 10%水合氯醛，注射用青霉素钠，医用生理盐水等。 1.2 实验方法 1.2.1 麻醉后仰位注射 大鼠适应性喂养3 d，术前禁食12 h。称重，10%水合氯醛按0.32 mL/100 g量腹腔注射麻醉(为避免扎到血管，正中腹白线外1 cm左右斜进针，进针后回抽)，个别大鼠可酌情追加剂量。麻醉后仰卧位于手术台上，头后仰位，经口腔进行气管插管(注意清理口腔、气道分泌物)。待呼吸、心率平稳后，左侧卧位固定于手术台上，消毒左侧胸前及腋窝下皮肤，并备皮。 1.2.2 g不同途径同骨料注意事项 于胸骨左缘3、4肋间或4、5肋间，心脏搏动最明显处，沿肋骨走行斜向剪开皮肤约2 cm，逐层分离皮下组织、肌肉，暴露3、4肋间或4、5肋间，可看到心脏暗影，用弯头止血钳在心脏搏动最明显处打开肋间隙，与此同时连接呼吸机，以保持肺内正压，设定呼吸频率60次/min，呼吸比为1:1，潮气量为2 mL/100 g，有条件时可接氧气。适应3min后，单人操作，用3枚自制拉钩在左、右、上三方向拉开胸壁，另一端用废针头固定于手术台上，调整拉钩位置，充分暴露心脏，剪开心包膜，轻轻推开脂肪垫，显示左心耳，持7-0针线，在其与肺动脉圆锥之间的左冠状动脉前降支(left descending anterior branch,LAD)下穿一缝合线，打一松结，松结内垫一小塑胶管，而后把冠脉及塑胶管一起进行结扎，造成心肌缺血。随后用一把直头止血钳夹闭皮肤及肌肉层，造成假关胸。规定时间后，松开止血钳，再次打开胸腔，一把显微镊轻轻提起结扎的线头，另一把显微镊顺势轻轻拔出垫管，恢复血流灌注。清理胸腔，挤压关胸。肌肉层连同肋骨进行8字缝合，皮肤及皮下脂肪层连续缝合。关胸前加大潮气量，膨肺，3次呼吸后调为正常。缝合后用自制针头抽吸胸腔内残留的气体、液体，形成自然状态下的负压。撤出呼吸机，恢复自主呼吸后，轻轻拔出气管插管，再次清理口腔及呼吸道。术后于青霉素钠15万单位肌注预防感染。手术时间长者可于尾静脉少量补液。术中及术后注意保温。 1.2.3 灌注前后st段弓背消失或减轻，心肌部分恢复红 肉眼所见:结扎后可见结扎范围心肌变白，血管供应范围心肌紫绀;再灌注后，心肌紫绀消失或减轻，变白心肌部分恢复红色。心电图示:结扎后ST段弓背抬高或与高耸的T波形成单向曲线，QRS波电压增高或(且)波幅增宽;再灌注后，ST段及T波下落，QRS波趋于术前。 1.3 主要分析指标 1.3.1 灌注后半功能点心电图 于术前、结扎后(5 min、30 min、60 min)、再灌注后(5 min、15 min、30 min)的不同时间点分别测心电图。观察P波、QRS波、T波、ST段及心律失常发生情况。 1.3.2 颈总动脉观察 72 h后，所有大鼠麻醉，颈部皮肤切开，分离颈总动脉，用自制动脉延伸管插入颈总动脉，伸入左心室，接换能器，利用心电监护仪观察左室压变化。 1.3.3 酸激酶、同工酶、谷草芽孢杆菌三成酶指标 测定心功能后，打开大鼠腹腔，进行腹主动脉取血，标本静置30 min后离心，取血清检测肌酸激酶(Creatine Kinase,C