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双波长法测定酮康唑和替硝唑 复合酮阴道泡腾片是我们在现代汉语中研究的一种长期疗效复合性阴道泡腾片剂。该片剂可以长时间粘附于阴道膜上,连续释放药物,避免了普通阴道片多次给药的缺陷,同时具有较好的治疗效果。其主要成分是酮康唑和替硝唑。文献中报道了多种关于酮康唑和替硝唑的分析方法,包括紫外法,HPLC法,气象色谱法,荧光法,毛细管色谱法等。对于同时测定酮康唑和替硝唑的分析方法未见报道。本文建立了双波长紫外分光光度法可不经分离同时测定酮康唑与替硝唑的含量,该法具有简便、快速、灵敏、准确的优点,可用于快速分析和样品测定,现报道如下。 1 测定试剂及仪器 UV-1700紫外分光光度计(日本岛津),AR124CN电子天平(上海奥豪斯仪器公司),酮康唑(南京白敬宇制药厂,含量≥99.0%,批号:(200804-08),替硝唑(浙江苏泊尔药业,含量≥99.0%,批号,其他试剂均为分析纯。 2 方法和结果 2.1 对照溶液的制备 精密称量酮康唑对照品100.32mg,用0.1mol/L HCl溶解并定容于100ml容量瓶中,摇匀。得酮康唑对照溶液。 精密称量替硝唑对照品101.43mg,按上述操作同法配制替硝唑对照溶液。 2.2 替硝唑测定波长的确定 精密吸取酮康唑和替硝唑储备液适量,分别置于100ml容量瓶中,用0.1mol/L HCl稀释至刻度并摇匀,制成酮康唑标准液(1)和替硝唑标准液(2)。另精密吸取储备液适量置于100 ml容量瓶中,用0.1mol/L HCl稀释至刻度并摇匀,配制成含有酮康唑和替硝唑药物的混合标准溶液(3)。以0.1mol/L HCl为空白对照,在200~400nm波长范围内对标准溶液(1)(2)(3)扫描,得到酮康唑和替硝唑及混合溶液的紫外吸收光谱(图1)。如图所示,在317nm处替硝唑标准液具有最大紫外吸收,而酮康唑几乎无吸收,对替硝唑测定无干扰,因此选用317nm作为替硝唑的测定波长。酮康唑在221nm处具有较大紫外吸收,而替硝唑在221nm和352nm处具有等吸收,为了排除替硝唑的干扰选择352nm作为参比波长,选择221nm作为酮康唑的测定波长。 2.3 方法研究 2.3.1 替硝唑标准曲线 精密吸取酮康唑和替硝唑储备液各5ml置于100ml容量瓶中,用0.1mol/L HCl稀释至刻度并摇匀,将此溶液经适当稀释配制成浓度约为1,2,4,8,10,20,30g/ml标准液,在317nm处以0.1mol/L HCl为空白对照测定其吸光度,以吸光度对混合溶液中替硝唑浓度作图,得替硝唑标准曲线。结果表明替硝唑在测定浓度范围内线性关系良好,回归方程为A=0.029C+0.0168,相关系数R=0.9995。 同法,将上述标准液分别在352nm和221nm处测定吸光度A1和A2并求出差值△A,以△A对混合溶液中酮康唑浓度作图,得酮康唑标准曲线。结果表明酮康唑在测定浓度范围内线性关系良好,回归方程为A=0.456C-0.0742,相关系数R=0.9996。 2.3.2 超声过滤液的制备 按照处方配制模拟复方酮替泡腾片粉,精密称取细粉适量,用0.1mol/L HCl适量分散,超声5min后定容至刻度,过滤。取续滤液2 ml至100ml容量瓶中,稀释至刻度,摇匀。在317nm,221nm,352nm处分别测定其吸光度,带入标准方程,求出药物浓度,计算回收率,改变加入药量,重复测定9次,结果见表1。 2.3.3 精密度与准确度 按照处方组成,取酮康唑,替硝唑和辅料适量,研磨混匀。精密称量上述粉末适量按照样品测定项下方法测定酮康唑和替硝唑含量,考察方法的精密度,结果表明酮康唑和替硝唑测定日内误差(RSD%,n=7)分别为1.03和0.62,日间误差(RSD%,n=7)为1.42和1.13。 2.4 超声仿真液 取自制复方泡腾片20片,精密称定,粉碎研磨。精密称取适量(约相当于酮康唑200mg,替硝唑200mg)置于100ml容量瓶中,加入0.1mol/L HCl适量,超声5min,继续加入0.1mol/L HCl稀释至刻度,摇匀,过滤。精密吸取续滤液2ml,置于100ml容量瓶中,加0.1mol/L HCl稀释至刻度,摇匀,分别在221、317和352nm处测定溶液吸光度,按照回收率项下计算酮康唑和替硝唑含量,结果见表2。 3 组分含量测定方法 本法无需分离和化学处理,直接对复方泡腾片中的两种组分进行测定,操作简便快速,测定结果准确。对于吸收光谱重叠,组分间相互干扰的复方制剂,不经过分离直接进行测定常用的分光光度法有双波长系数法,双波长导数法,双波长比值光谱法等,我们曾经尝试用双波长导数法和比值光谱法对酮康唑和替硝唑进行测定,但无论哪种方法,替硝唑对于酮康唑的测定都会有干扰。因此经过比较,我们最终选择双波长