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复方酮康唑乳膏的处方选择 丙酮醇乳膏是我院的一种自制制剂。它主要用于治疗浅表真菌感染的体虱、股虱、手脚虱、花斑虱等。愈合效果好。该制剂主要成分为酮康唑及丙酸氯倍他索(每10 g样品含酮康唑100 mg、丙酸氯倍他索5 mg),在放置过程中极易变色(乳白→粉红→深红),不仅使制剂疗效降低,而且影响成品外观。为保证制剂质量,增加制剂稳定性,笔者选用几种常用的稳定剂,比较制剂的氧化变色过程,并参考文献建立高效液相色谱(HPLC)法测定其含量变化。 1 细菌、试剂和仪器 日本岛津LC-10ATvp型高效液相色谱仪,SPD-10Avp紫外可见检测器,杭州英谱公司色谱数据工作站,7725型进样器,梅特勒-托利多204AB-E型电子天平,普通细菌培养箱。复方酮康唑乳膏为本院自制;酮康唑及丙酸氯倍他索对照品(中国药品生物制品检定所);酮康唑原料(南京第二制药厂,批号含量99.1%);丙酸氯倍他索原料(上海华联制药有限公司,批号020605,含量98.4%);其他辅料(均符合《中华人民共和国药典》2000年版的规定);甲醇为色谱纯;磷酸、三乙胺等为分析纯;水为重蒸馏水。 2 方法和结果 2.1 硫醚的合成 配制5份含不同稳定剂的复方酮康唑乳膏:A份不加任何稳定剂,B份加入0.5%硫代硫酸钠,C份加入0.5%无水亚硫酸钠,D份加入0.05%乙二胺四乙酸二钠,E份加入0.5%无水亚硫酸钠和0.05%乙二胺四乙酸二钠。5份样品按成品包装同置于恒温恒湿(35℃,相对湿度75%)的培养箱中放置6个月,于0,2,4,6个月取样,观察颜色变化,测定含量。 2.2 变色过程观察 5份样品每隔0,2,4,6个月分别观察颜色变化情况,以白色(-),微红色(+),淡红色(++),红色(+++)来表示其变色过程,结果见表 1。 2.3 hplc测定了复方酮康唑乳膏的含量 2.3.1 理论塔板数及回收度 色谱柱:VP-ODS(150 mm×4.6mm),流动相:0.35%磷酸溶液[三乙胺调pH (6.6±0.1)-甲醇(30:70),流速:0.8 mL·min-1,检测波长:240nm,柱温:室温,进样量:20μL。理论塔板数按酮康唑峰计算应≥2000,酮康唑与丙酸氯倍他索的分离度应3.0。在上述色谱条件下,对照品、空白辅料、样品色谱图见图1～3。 2.3.2 线性关系的考察 精密称取80℃减压干燥至恒温的酮康唑202.7 mg和105℃干燥至恒重的丙酸氯倍他索11.0 mg置100 mL容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为标准贮备液。精密量取贮备液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mL,各置25 mL容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀。照上述色谱条件,进样20μL,记录色谱图,以峰面积A对浓度C进行线性回归,结果:酮康唑和丙酸氯倍他索的浓度与其峰面积各呈良好的线性关系,其线性范围分别为81.08～405.40μg·mL-1,C=4.626 3+2.212 5×10-5A,r=0.999 6;4.40～22.00μg·mL-1,C=0.938 1+1.808 4×10-5A,r=0.999 1。 2.3.3 样品的加标回收 根据处方比例精确配制含酮康唑和丙酸氯倍他索各为标示量80%,100%,120%的模拟样品6份,按样品测定项下方法操作,得平均回收率,结果酮康唑和丙酸氯倍他索平均回收率分别为101.2%,102.1%。 2.3.4 色谱含量测定 精密称取样品约2 g(相当于酮康唑20 mg,丙酸氯倍他索1mg)置100 mL量瓶中,加入流动相约70 mL,于80℃水浴中加热约数分钟,振摇,使酮康唑和丙酸氯倍他索溶解,放冷至室温,加流动相至刻度,摇匀,置冰浴中冷却2 h,取出后迅速滤过,放至室温,取20μL注入色谱仪,记录色谱图,按外标一点法以峰面积计算其含量,结果见表2。 3 测定波长的确定 酮康唑具有酰胺基和醚基,都是极易氧化变色的结构,特别是在酸性条件下更易氧化,丙酸氯倍他索相对较稳定。复方酮康唑乳膏中不加任何稳定剂,在恒温恒湿的相同条件下,2个月即开始变色,含量亦开始下降,特别是酮康唑的含量6个月只有标示量的78.3%,不能保证制剂质量。笔者选用2种碱性氧化剂,同时加入金属络合剂进行实验。实验结果表明:选用0.5%无水亚硫酸钠作为抗氧剂,并配以金属络合剂0.05%乙二胺四乙酸二钠,可明显抑制该制剂的氧化变色,从而保证制剂成品外观,确保制剂质量。色谱条件的选择:关于检测波长,主要考虑到样品中丙酸氯倍他索的含量较低,选择240 nm作为检测波长与丙酸氯倍他索最大吸收波长(以甲醇为溶剂)239 nm较近,可使两种成分的色谱峰相匹配,且吸收值较稳定;关于磷酸溶液的pH值,主要对酮康唑影响较大,笔者选择PH 6.6,可使酮康唑保留时间