星点设计-效应面法优化连钱草总黄酮提取工艺.docxVIP

星点设计-效应面法优化连钱草总黄酮提取工艺 本实验与紫外分光光度法相结合，利用效应优化法（srm）对连银草中总黄酮进行了优化，并采用了非线性数学模型调整方法，将自变量与因变量的关系扩展到曲线，使实验数据更加准确，比传统的正交分析法更可靠。 1 材料表面 1.1 仪器 UV-752型紫外-可见分光光度计;FA-1104型电子分析天平;KH-500B型超声波清洗仪;FW100型高速万能粉碎机。 1.2 其他试剂鉴定 芦丁对照品(中国药品生物制品检定所,批号:080-9303);水为蒸馏水;其他试剂均为分析纯。 连钱草药材,采于江苏及其周边地区,经南京中医药大学中药系药用植物教研室炮制教研室巢建国教授鉴定为唇形科植物活血丹Glechoma longituba(Nakai) Kupr.的地上部分。粉碎,备用。 2 方法和结果 2.1 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品22.85 mg,置于100 mL量瓶中,加甲醇约60 mL,密塞,超声使其溶解,放冷,加甲醇至刻度,摇匀,得芦丁对照品溶液(即每mL溶液中含芦丁对照品为0.228 5 mg)。 2.2 超声提取法 取连钱草粉末约0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入55%甲醇40 mL,密塞,称定质量,室温下超声提取(功率250 W,100 kHz)90 min,放冷,补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。 2.3 紫外-可见分光光度法 分别精密吸取上述供试品溶液2 mL和芦丁对照品溶液2 mL,置25 mL量瓶中,加水至6 mL,加5%亚硝酸钠溶液1 mL,摇匀,放置6 min,加10%硝酸铝溶液1 mL,摇匀,放置6 min,加入氢氧化钠试液10 mL,再加水至刻度,摇匀,放置15 min,分别作为供试品溶液和对照品溶液,并以相应的试剂为空白,照紫外-可见分光光度法(《中华人民共和国药典》2010年版一部附录 VA),于200～800 nm扫描,结果在510 nm处有最大吸收,故以510 nm为测定波长。 2.4 方法研究 2.4.1 标准曲线的绘制 精密量取上述芦丁对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL,分别置于25 mL量瓶中,各加水至6 mL,加5%亚硝酸钠溶液1 mL,摇匀,放置6 min,加10%硝酸铝溶液1 mL,摇匀,放置6 min,加入氢氧化钠试液10 mL,再加水至刻度,摇匀,放置15 min,以相应的试剂为空白,在510 nm处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标绘制标准曲线,得回归方程:A=11.27C+0.001(r=0.999 5),式中A代表吸光度,C代表对照品浓度(mg/mL),对照品浓度在0.009 14～0.054 84 mg/mL范围内呈良好的线性关系。 2.4.2 测定的精密度试验 取浓度为0.036 56mg/mL的对照品溶液,连续测定6次,对照品溶液吸光度平均值为0. 416,RSD为0.13%,表明测定方法的精密度良好。 2.4.3 供试品溶液稳定性 精密吸取同一份供试品溶液2 mL,置于25 mL量瓶中,照2.4.1项下的显色方法处理样品,于510 nm测定吸光度,每间隔5 min测定1次,在30 min内,吸光度平均值为0.423,RSD为0.81%,说明供试品溶液在30 min内显色稳定。 2.4.4 重复性测定结果 取同一批次连钱草粉末,制得6份供试品溶液,于510 nm依法测定吸光度并计算出连钱草中总黄酮的平均含量为36.49 mg/g,RSD为1.12%,表明该方法的重复性良好。 2.4.5 加样回收及加样回收率 取已知含量连钱草粉末6份,每份约0.2 g,精密称定,分别置于锥形瓶中,各加入新鲜配制的芦丁对照品溶液(浓度为1.425 mg/mL)5 mL,按2.2项下供试品溶液的制备方法制备样品,于510 nm处依法测定吸光度,计算加样回收率,结果平均加样回收率为99.32%,RSD为2.38%。 2.5 sd-sd-优化了总黄酮提取工艺，包括金草中的总黄酮 2.5.1 提取溶剂的选择 按2.2项下供试品溶液的制备方法提取连钱草中总黄酮,其中影响提取效果的可能因素较多。为了便于操作和保证实验精度,以连钱草总黄酮的含量为指标,采用单因素试验,比较了超声法、加热回流法及渗漉法的提取效率和操作步骤的繁易程度,最后决定采用超声提取法;在溶剂的选用上,水、甲醇、乙醇均是提取黄酮类成分的常用溶剂,尤其是甲醇,提取效果较佳。(本实验从验证星点设计实验的准确性出发,故而选之,并未考虑到工业化生产,可以考虑用乙醇做替代实验。)进而分别对甲醇的浓度(40%、50%、60%、70%、80%、90%),超声提取的时间(20、40、60、120、180 min),超声次数(1、2、3、4次)以及溶剂的用量